细胞名称 抗精核蛋白;HP2培养
形态特性 淋巴母细胞样
品Pai 半贴壁生长
特征特性 可产生单克隆抗体,抗原为精核蛋白。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
传代方法 保持细胞密度在1×105~1×106 cells/ml之间,每周换液2~3次
传代情况 不详
冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR -
同工酶
染色体
使用权限 A类
抗精核蛋白;HP2培养贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱(或PBS洗1-3次)。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml,按此比例进行消化,(根据经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml完全培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后分置其它无菌培养瓶内,加入完全培养基后继续培养或实验。
操作流程:
1.1 主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线
Anti-Plectin/FITC 荧光素标记网蛋白抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rat IgG (亲和纯化) 大鼠IgGMulti-class antibodies规格: 1mg
高迁移率族蛋白-1抗体 Anti-HMGB1 0.1ml
Goat Anti-Guinea pig IgG 羊抗豚鼠IgG 1mg
FGF8 英文名称: 成纤维细胞生长因子8抗体 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-RelB(Ser573) 磷酸化核转录因子NFKB-RelB蛋白抗体 规格 0.1ml
Rat IgG (亲和纯化) 大鼠IgGMulti-class antibodies规格: 1mg
PS(Human plasma anticoagulant protein S) ELISA Kit 人血浆抗凝蛋白SMulti-class antibodies规格: 48T
Anti-RAMP-1 受体活性修饰蛋白1抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh HDC L-组氨酸脱羧酶抗体 规格 0.1ml
MPO-ANCA IgG(Mouse myeloperoxidase-antineutrophil cytoplasmic antibody IgG) ELISA Kit 小鼠髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG 96T
PDE4A8 英文名称: 磷酸二酯酶4A8抗体 0.2ml
Phospho-c-Kit (Tyr730) 英文名称: 磷酸化原癌基因c-kit抗体 0.1ml
Anti-RAMP-1 受体活性修饰蛋白1抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml
TACE(Human TNF Alpha converting enzyme) ELISA Kit 人坏死因子α转化酶 96T
RNF19B 英文名称: 环指蛋白19B抗体 0.1ml
Rhesus antibody Rh MHC class I antigen B 15 组织相关抗原HLA-B15抗体 规格 0.1ml
Dsg-1(Human desmogleins 1) ELISA Kit 人桥粒芯糖蛋白-1Multi-class antibodies规格: 48T
CEP63 英文名称: ZX体蛋白63抗体 0.1ml
Anti-Hepatitis E Virus ORF3 戊型肝炎病毒抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml
TIEG1(Human TGF-beta-inducible early response gene-1) ELISA Kit 人TGF-β诱导早期基因1Multi-class antibodies规格: 48T
Anti-Histone H3-like protein 组蛋白H3样抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Mesothelin 间皮素抗体 规格 0.1ml
BetaGD(Human Beta-glucuronidase) ELISA Kit 人β葡萄糖醛酸苷酶 96T
RRAGC 英文名称: RAS相关GTP结合蛋白C抗体 0.2ml
CHIP 英文名称: E3泛素蛋白连接酶CHIP蛋白抗体 0.1ml
Anti-Histone H3-like protein 组蛋白H3样抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml
悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入完全培养基继续培养,如要高浓度可先离心1000rpm,5min后加入完全培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。需要指出的是,在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。