细胞培养中有哪些要注意的问题?又该如何解决呢?
1谷氨酰胺的作用是什么?
几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有较高的要求。谷氨酰胺脱掉氨基后,可作为培养细胞的能量来源,参与蛋白质的合成和能量代谢。在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。所以,各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。
谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置-20℃冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4度冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。
2在培养基中加入HEPES有何好处?
培养基中Z常用的Buffer system是碳酸氢盐,它可提供营养,但却在生理PH值条件下会降低缓冲能力。而HEPES是一种很强的Buffer,加入HEPES能使细胞培养基在PH7.2-7.6条件下缓冲能力增强。
Hepes的贮存液浓度一般为1M,常温保存。培养基中的终浓度为25mM,即5ml 1M的Hepes加入到200ml完全培养基中。
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许多生物相关研究都使用细胞,但是细胞系污染和错误鉴定一直是一个普遍存在的问题,据统计约30%细胞系被交叉污染或错误辨识。因此NIH、ATCC等权威机构强烈建议在使用培养细胞的时候进行鉴定,旨在约束因细胞交叉污染和错误辨识所导致的无效科研数据的不断扩增。目前很多杂志也越来越重视细胞株鉴定,2014年12月、2015年2月Science杂志分别发表文章ZT阐述细胞交叉污染和错误辨识的严重性,2015年4月Nature通知旗下所有杂志将要求作者鉴定论文中所用细胞系。
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(编辑:tanxi)