Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase
第三代耐热逆转录酶
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶 | 11111ES92 | 10000 U | 1426.00 |
Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶 | 11111ES93 | 5×10000 U | 4626.00 |
产品描述
Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase是在Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的新一代逆转录酶，与Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase相比，其cDNA合成速度快，且热稳定性大幅度提高，可耐受高达60℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达19.8 kb的cDNA。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 |
11111ES92 (10000 U) | 11111ES93 (5×10000 U) |
11111-A | 5×Hifair® Ⅲ Buffer | 250 μL | 250 μL×5 |
11111-B | Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 50 μL | 50 μL×5 |
产品应用
全长cDNA文库构建；终点法PCR；实时定量PCR等。
活性定义
以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：200 U本酶和0.6 μg λDNA-Hind Ⅲ在37℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：200 U本酶和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测：200 U本酶和1 μg小鼠肝脏总RNA在37℃下孵育1 h，RNA电泳谱带不发生变化。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存。
注意事项
1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染；
2）所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解；
3）为保证GX率逆转录，建议使用高质量的RNA样本；
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
第—链cDNA合成操作步骤
1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第—链cDNA的产量。）
组分 | 使用量 |
RNase free ddH2O | to 13 μL |
Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 ng/μL) or Gene Specific Primers (2 μM) | 1 μL |
or 1 μL |
or 1 μL |
模板RNA | Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:10 pg-500 ng |
65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液，并用移液器轻轻吹打混匀。
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
组分 | 使用量 |
上一步的反应液 | 13 μL |
5×Hifair® Ⅲ Buffer | 4 μL |
dNTP Mix (10 mM) | 1 μL |
Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 1 μL |
RNase inhibitor (40 U/µL) | 1 μL |
3. 逆转录程序设置
温度 | 时间 |
25℃ | 5 min |
55℃ | 15-30 min |
85℃ | 5 min |
【注】：1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略；
2）逆转录温度：推荐使用55℃；对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到60℃；
3) 可将逆转录时间延长到45-60min，有助于提高产量；
4）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。
※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
相关产品
产品名称 | 货号 | 规格 | 价格（元） | 促销价（元） |
Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) | 11121ES60 | 100 T | 935 | - |
Hifair®II 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus) | 11123ES60 | 100 T | 955 | - |
Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix | 11137ES60 | 100T | 1193 | - |
Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) | 11139ES60 | 100T | 1303 | - |
Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus) | 11141ES60 | 100T | 1383 | - |
Hifair® qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox ) | 11201ES08 | 5 mL | 740 | 498 |
Hifair® qPCR SYBR® Green Master Mix (Low Rox Plus) | 11202ES08 | 5 mL | 740 | 498 |
Hifair® qPCR SYBR® Green Master Mix (High Rox Plus) | 11203ES08 | 5 mL | 740 | 498 |
Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法，No Rox) | 11195ES08 | 5 mL | 1653 | 663 |
Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法，Low Rox) | 11196ES08 | 5 mL | 1653 | 663 |
Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法，High Rox) | 11197ES08 | 5 mL | 1653 | 663 |
Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法，No Rox) | 11198ES08 | 5 mL | 1466 | 586 |
Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法，Low Rox) | 11199ES08 | 5 mL | 1466 | 586 |
Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法，High Rox) | 11200ES08 | 5 mL | 1466 | 586 |
HB191021
11111ES92 第三代耐热逆转录酶
11111ES92*Hifair? III Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶价格
11111ES93*Hifair? III Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶厂家
11111ES93*Hifair? III Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶多少钱
11111ES93*Hifair? III Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶价格
Hifair™ III Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶
耐热M-MLV逆转录酶 耐热MMLV反转录酶
