糖尿病自身免疫抗体检测-GAD抗体说明书
一、糖尿病自身免疫抗体检测-GAD抗体预期用途
RSR 公司的 GAD65 自身抗体(GAD Ab)ELISA 试剂盒仅用于定量检测人血清中的 GAD
自身抗体,需专业技术人员操作。
胰岛β细胞自身抗体是 I 型糖尿病(一型 DM)重要的血清标志物,该抗体可以识别以下抗
原,包括胰岛素,谷氨酸脱羧酶,胰岛细胞抗原 IA-2 或者 ICA-512 和锌转运蛋白 8(ZnT8)。
二、检测原理
在 RSR 的 GAD 自身抗体 ELISA 检测方法中,患者血清,标准品和质控品中的 GAD 抗体,
可以经 1 小时孵育和微孔板上包被的 GAD65 结合,然后洗板。在第二步孵育期间加入-生
物素标记的 GAD65,这样 GAD 抗体就在 GAD65 与 GAD65-生物素之间就形成一个桥梁。
结合的 GAD65-生物素的数量是由第三步加入的链霉亲和素—过氧化物酶的量决定,因为它
能与 GAD65-生物素特异性的结合。洗去未结合的链霉亲和素—过氧化物酶,加入 TMB,
形成蓝色复合物。加入终止剂终止反应,微孔板由蓝色变为黄色。在波长 450nm 和 405nm
读取吸光度。当吸光度较高表示样本中的 GAD 自身抗体含量较高。当吸光度较高建议在
405nm 读数(200U/ml 以上),当吸光度较低建议在 450nm 读数(低于 10U/ml 以上)。检测范围为 5-2000U/ml
三、ELISA试剂盒
受试样本要求及贮存
待检标本应立即分离出血清进行检测,或-20℃ 分装保存,尽量避免反复冻融,防止储存温
度过高。每份样本需要 50μl 血清(每孔 25μl,实验建议进行复孔)避免使用脂血、溶血
的样本,不宜使用血浆进行检测。
需要时, 在室温下解冻测试血清并轻轻混匀。
检测前用离心机分离血清(推荐速度:10-15,000g,离心 5 分钟)去除微粒物质。当血
清浑浊或有颗粒时,请勿省略离心处理步骤。
四. 该试剂盒可与本公司其他胰岛细胞自身抗体检测试剂盒包括IA-2 Ab和ZnT8 Ab酶免试剂盒联合使用提高I型糖尿病诊断的灵敏性和特异性。
根据2015年国际糖尿病相关抗体标准化测试验证(IASP2015),该试剂盒灵敏性86%,特异性98%,临界值为5 U/mL (NIBSC 97/550)。
样本要求: 25微升人血清,避免使用脂血、溶血及血浆样本。
组分性状: 96孔板,液体和冻干粉