脱脂奶粉 ( 杂交专用 )50g方法使用方法:
一、交换反应 1. 实验前需自备的试剂:7 M 醋酸铵、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量离心管中制备下列反应液.
3. 37℃反应 30 分钟。
4. 70℃加热 5~10 分钟使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀时使其终浓度达 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷无水乙醇,-20℃放置 30~60 分钟。
7. 离心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。 注:通过第 5~8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP,如要 完全将其除去时,乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用苯酚抽 提除去蛋白质时,请在第 8 步之后进行。
脱脂奶粉 ( 杂交专用 )50g方法产品介绍:
脱脂奶粉 ( 杂交专用 )50g方法确定洗膜温度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此条件下的Z佳洗膜温度比 Tm 低 5-12℃,一般情况下可以在 55℃进行洗膜。Oligo 探针可以室温洗膜。 四、预杂交步骤 预杂交就是用不含探针的超级杂交液跟印迹膜进行孵育,其目的是用所含 的非特异性 DNA 分子(鲑精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物将印 迹膜上会非特异地吸附探针分子的位点封闭,否则这些位点会吸附标记的探 针,造成高背景。
1. 将结合了靶分子的硝酸纤维素印迹膜或尼龙印迹膜浸泡于自备的 6× SSC 溶液中,使其充分湿润。
2. 将湿润的印迹膜置于一塑料杂交袋中(塑料袋Z好预先封口,再剪掉一角, 留一个小口),按每平方厘米印迹膜加 0.2 mL 超级杂交液的比例沿小口 加入超级杂交液,然后用塑料封口机将口封牢。 3. 将此塑料袋浸没入温度设定在Z佳杂交温度的恒温水浴中或杂交炉中,保 温 1-2 小时,延长到 12-16 小时亦可。注意保温过程中塑料袋应在不停 的摇动状态中,使超级杂交液与印迹膜充分接触。
杂交步骤:
1. 如果标记的探针是双链核酸,则需经变性处理。具体操作是:根据探针浓 度和杂交所需探针的量计算出所需的探针体积,取出所需体积的探针到一 干净的硅化的塑料离心管中,加入等体积的本产品,吹打混匀后室温放置 5 分钟变性后,将探针样品放入冰浴中冷却,加入 0.05 倍体积的自备的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等体积的自备的 0.4 M 的 HCl 溶液。 将探针样品保存在冰浴中直至需要。如果是单链 DNA 或 RNA 探针,则 不需变性,直接使用。
2. 将单链探针或变性后的双链探针加入到完成了预杂交的杂交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探针后用热封机封口)。探针的加入量视探针标记效率 而定,一般要求终浓度不能低于 1-2 ng/mL。如果检测基因组中的单拷 贝基因,探针的加入量应加大,而对于检测克隆的基因片段,则探针的量 可减少。如果是放射性探针,应将此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 杂交袋发生遗漏、污染工作环境。
3. 在选定的杂交温度下继续保温,时间一般为 6-12 小时。 六、洗膜步骤。注意在下面的所有操作过程中,一定不要使印迹膜干燥。
L-缬安酸L-valinepR5g
S9007-1GSpectinomycin 盐酸壮观霉素22189-32-81g48
ER1361TaaI (HpyCH4III)200 units8
ER0031Alw26 I1000 units
DTNB25g
石油醚 30-60℃¤Petroleum etxen 30-60 ℃ ¤AR500ml
LP-0200.2 ml 硅化PCR薄壁管265
A0815-2.5GAgarose II 低熔点琼脂糖9012-36-62.5G
5-Fluorouracil5g
PEG 400500g
还原谷胱甘肽(+4℃) Glutathione Reductase BR 1g
甘酸 Aminoacetic acid AR 100g
N-甘酰甘酸 N-glycylglycine BR 25g
马尿酸 Hippuric acid BR 100g
顺铂 Cisplatin 15663-27-1 >98.5%,细胞培养级,BR
顺铂(标准品) Cisplatin 15663-27-1 HPLC>98%,标准品
氢溴酸西酞普兰 Citalopram HBr 59729-32-7 >98%,BR
氢溴酸西酞普兰 Citalopram HBr 59729-32-7 >98%,BR
小鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra/CD121)ELISA试剂盒 ,英文名: IL1Ra/CD121 ELISA Kit
大鼠红细胞生成素(EPO)ELISA检测试剂盒RatErythropoietin,EPOELISAKit 96T/48T
人TAR DNA结合蛋白43(TARDBP/TDP43)免疫试剂盒 Human TARDBP ELISA Kit
英文名称MouseHeatShockProtein40ELISAKit小鼠热休克蛋白40(HSP40)规格:96T/48T
TrpE融合蛋白扩增试剂盒10次
Rabbitnitricoxidesynthase,NOSELISA试剂盒兔一氧化氮合成酶(NOS)ELISA试剂盒规格:96T/48T
小鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Human nephrin (nephrin) ELISA Kit 人蛋白(nephrin)ELISA试剂盒
humanthyroidstimulatinghormonereceptorantidoby,TRAbELISAKit 人抗促甲状腺素受体抗体(TRAb)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
humananti-nucleosomeantibodyIgG,AnuA-IgGELISA试剂盒人抗核小体抗体IgG(AnuA-IgG)ELISA试剂盒规格:96T/48T
植物铜ATP酶(Cu++-ATPase)活性比色法量检测试剂盒20次
HumanUbiquitin,UbELISAKit人泛素蛋白(Ub)ELISA试剂盒规格:96T/48T
白介素1(IL-1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人胰岛素受体α(INSRA)免疫试剂盒 Human insulin receptor α,INSRA ELISA kit
人抗肾小球基底膜抗体(GBM)ELISA试剂盒 ,英文名: GBM ELISA Kit
RatgranzymesA,Gzms-AELISA试剂盒大鼠颗粒酶A(Gzms-A)ELISA试剂盒规格:96T/48T
HumanEstrogen-inducedproteinpS2ELISA试剂盒人雌激素诱导蛋白PS2ELISA试剂盒规格:96T/48T
HumanHydroxyproline-RichGlycoprotein,HRGPELISAKit人羟脯氨酸糖蛋白(HRGP)ELISA试剂盒规格:96T/48T
脱脂奶粉 ( 杂交专用 )50g方法大鼠透明质酸(HA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人微管多特异性有机阴离子转运蛋白2(ABCC3)免疫试剂盒 Human Canalicular multispecific organic anion transporter 2,ABCC3 ELISA kit
ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒 紫外分光光度法 50管/48样
RatreceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKLELISA试剂盒大鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)ELISA试剂盒规格:96T/48T
HumanInterleukin16,IL-16ELISA试剂盒人白介素16(IL-16)ELISA试剂盒规格:96T/48T
HumanMucin-7,MUC7ELISAKit人粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA试剂盒规格:96T/48T