一、检测原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被伏马毒素抗原,样本中的伏马毒素和微孔条上预包被的抗原竞争抗伏马毒素抗体,同时抗伏马毒素抗体与酶标二抗(酶标物)相结合,经TMB底物显色,样本吸光度值与其所含伏马毒素量呈负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,与标准曲线比较即可得出样品中伏马毒素(FB)的含量。
二、检测范围
本试剂盒是应用ELISA技术研发的药物残留检测产品,与仪器分析技术比较,能经济、快速地检测出小麦、玉米、饲料等样品中伏马毒素(FB)的含量。
三、试剂盒组成
酶标板1块,96孔/板
标准液6瓶(1.0 mL/瓶):0 ppb,2ppb,5ppb,20ppb,40ppb,100ppb
酶标记物…………………………………7mL
抗体工作液 ………………………………7mL
底物液A……………………………………7mL
底物液B……………………………………7mL
终止液…………………………………………7mL
10×浓缩洗涤液……………………………50mL
说明书………………..………………1份
四、使用单位需自备的设备及试剂
(1)仪器微孔板酶标仪(450 nm/630 nm)振荡器离心机涡旋仪粉碎机电子天平(感量0.01 g)
(2)器材单道微量移液器:20 μL~200 μL,100 μL~1000 μL多道微量移液器:30 μL~300 μL
(3)试剂 甲醇、氯化钠、去离子水
五、酶联免疫检测步骤测定前须知:
1、 使用之前将所有试剂和需用微孔板回升至室温。
2、 使用之后立即将所有试剂放回2~8 ℃。
3、 在使用中不要让微孔干燥。
4、 在ELISA分析中的重复性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
5、 在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖板膜盖住微孔板。
测定步骤:
1、 将所需试剂和微孔板从冷藏环境中取出,在室温下平衡30 min,每种液体使用前均须摇匀。注意 标准液均需做2个平行试验。
2、 加样:(切勿颠倒试剂加入顺序)加酶标物50 mL到对应的微孔中,再加入标准品/样本50 mL/孔,Z后加入抗体工作液50 mL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温25 ℃避光反应30min。
3、 洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,加洗涤液 250 μL/孔,每次浸泡15~30 s,充分洗涤4~5次,用吸水纸拍干。
4、 显色:加入底物液A 50 mL/孔,再加入底物液B 50 mL/孔轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温避光反应15 min。
5、 测定:每孔各加50 μL终止液,设定酶标仪在450 nm处,测定OD值(建议用450/630 nm双波长检测,在5 min内读完数据)。
六、试剂盒灵敏度、准确度、精密度
试剂盒灵敏度:2ppb
样本Z低检测限:玉米、小麦等粮食作物及饲料………………200ppb
回收率:玉米、小麦等粮食作物及饲料……………85±15%
精密度: 试剂盒的变异系数均小于10%
七、贮藏条件及保存期
贮藏条件:在2~8 ℃保存试剂盒。
保存期:本试剂盒有效期为12个月。
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