ReverTra Ace qPCR RT Realtime PCR用预混型cDNA合成试剂盒 东洋纺 to...

ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover(Code No. FSQ-301)中添附了具有QLDNA分解活性的gDNA Remover，通过在逆转录反应前处理模板RNA，可简便地制备不含基因组DNA的cDNA。Z适用于检测目的基因中存在假基因，或无法在横跨内含子的位置上设计引物，模板RNA中有基因组DNA残留问题等Realtime PCR实验。特征 特征1. 完全预混型试剂本试剂是在?20℃条件下也不会冻结的完全预混型试剂。只需添加模板RNA和水，即可简便地合成重复性良好的cDNA。　特征2. 逆转录反应(?)对照溶液容易配制由于添附有同样预混型的no-RT Control，逆转录反应（?）对照溶液也很容易配制。特征3. 实现了更广的可定量扩增区域（dynamic rang）由于采用了Oligo dT和Random Primer按Z佳比例混合的primer mix，RNA的整个区域可进行均一、GX率的逆转录反应。因此，可对更广的可定量扩增区域进行分析。特征4. 与Realtime PCR试剂的高适应性采用了对Realtime PCR的反应体系影响Z小的组分，即便向PCR反应液中带入Z多20%液量的逆转录反应液，也能显示出很好的线性。Z适用于低表达量mRNA的高灵敏度检测。特征5. 可简便、迅速地去除基因组DNA按顺序添加去除基因组DNA的试剂和逆转录反应试剂，只需20分钟即可配制不含基因组DNA的cDNA。 实验例 实验例1　与其他公司预混型cDNA合成试剂逆转录反应效率（cDNA合成量）的比较 以HeLa total RNA100ng为模板，按各公司试剂盒的推荐条件进行逆转录反应，再用Realtime PCR对5种目的基因进行定量。 结果可见，用本试剂盒可得到Z高合成量。●cDNA合成 试剂：ReverTra Ace qPCR RT Master Mix（Code No.FSQ-201）及其他公司同类型（预混型）产品 模板：HeLa total RNA 100ng /10μl反应体系 反应条件：各公司试剂盒推荐的条件 ●Realtime PCR试剂：THUNDERBIRD SYBR? qPCR Mix（Code No.QPS-201） 模板：上述cDNA 2μl/20μl反应体系(带入量10%)目的片段：代表性基因5种 测定用仪器：Applied Biosystems 7900HT 实验例2　模板RNA量对合成效率的影响（标准曲线直线性的确认） 为评价模板RNA量对逆转录合成效率的影响，以HeLa total RNA 2pg?2μg（8个梯度）为模板进行逆转录反应，再用Realtime PCR对5种目的基因进行定量。结果可见，5种目的基因的标准曲线没有交叉，显示了很好的直线性。由此可见，用本试剂盒可对各种浓度范围的RNA进行同等效率的逆转录。●cDNA合成 试剂：ReverTra Ace qPCR RT Master Mix（Code No.FSQ-201） 模板：HeLa total RNA 2pg-2μg /20μl反应体系●Realtime PCR试剂：THUNDERBIRD SYBR? qPCR Mix（Code No.QPS-201） 模板：上述cDNA2μl/20μl反应体系（带入量10%） 目的片段：代表性House Keeping Gene 5种 测定用仪器：Applied Biosystems 7900HT 实验例3　gDNA Remover去除基因组DNA效果的确认 为了确认gDNA Remover去除基因组DNA的效果，按以下条件进行了逆转录反应，再以β-Actin为目的片段进行Realtime PCR。 结果可见，gDNA Remover处理（＋）、逆转录（?）〈下面③〉的条件下无法确认到扩增，说明基因组DNA已被去除。 ●cDNA合成 试剂：ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover（Code No.FSQ-301） 模板：自制的HeLa total RNA 0.5μg /10μl反应体系 条件：用gDNA Remover添加（＋）、或不添加（?）的4×DN Master Mix去除gDNA后，再分别用5×RT Master MixⅡ或5×RT Master Mix Ⅱ no-RT Control进行逆转录反应 ●Realtime PCR试剂：THUNDERBIRD SYBR? qPCR Mix（Code No.QPS-201） 模板：上述cDNA 2μl/20μl反应体系（带入量10%） 目的片段：ACTB（188bp） 测定用仪器：Applied Biosystems 7900HT 实验例4　与其他公司同类型产品去除基因组DNA效果的比较 向HeLa total RNA中添加过量的人基因组DNA，通过该实验，与其他公司同类型产品比较去除基因组DNA的效果。 结果可见，ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover去除基因组DNA的效果Z好。 ●cDNA合成 试剂：ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover（Code No.FSQ-301）及其他公司同类型试剂盒2种 模板：HeLa total RNA（0, 1pg, 10pg, 100pg, 1ng, 10ng,100ng, 1μg）＋人gDNA 100ng/20μl反应体系 条件：各公司试剂盒的推荐条件●Realtime PCR试剂：THUNDERBIRD SYBR? qPCR Mix（Code No.QPS-201） 模板：上述cDNA 2μl/20μl反应体系（带入量10%） 目的片段：ACTB（188bp） 测定用仪器：Applied Biosystems 7900HT 简要备注 Q1. 推荐反应时间为15分钟，如果延长时间能否提高cDNA的合成量？A1. tRNA等量很多的RNA全部进行逆转录反应时，延长反应时间可提高收量，但一般情况下推荐37℃15分钟可得到足够的cDNA。Q2. 哪些RNA可作为模板RNA使用？ A2. Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各种RNA都可以使用。Q.3 是否需要RNase H处理？ A3. 由于模板RNA的残留会对PCR产生YZ作用，一般情况下，逆转录反应结束后需通过RNase H对模板RNA进行分解。但本试剂盒采用了本公司新开发的系统，模板RNA在逆转录反应后会被非酶性去除，因此逆转录反应后无需进行RNase H处理。 参考文献 1）K.Miyazaki et al.,J.Bacteriology.,185:2219?2226（2003）2）A.Nezu et al.,Biochem.J.,263:59?66（2002）3）S.Nakashima et al.,J.Biochem.(Tokyo),131:241?246（2002）4）S.Atsumi et al.,EMBO J.,20:5453?5460（2001）5）Y.Yabuta et al.,Plant Cell Physiol.,41:666?675（2000）6）S.Lee et al.,Gene,245:253?266（2000） 价格表 （点击品名即可下载产品说明书）品名及内容 包装 保存 温度 Code No. 价格 ReverTra Ace qPCR RT Master Mix?5×RT Master Mix?5×RT Master Mix no-RT Control?Nuclease-free Water 200次份* -20℃ FSQ-201 RMB 2,000 1,000 ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover?gDNA Remover ?4×DN Master Mix ?5×RT Master Mix II ?5×RT Master Mix II no-RT Control?Nuclease-free Water 200次份* -20℃ FSQ-301 RMB 2,8001,198 *10μl反应体系的次数。※ReverTra Ace qPCR RT Master Mix（Code No. FSQ-201）的5×RT Master Mix及5×RT Master Mix no-RT Control与ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover（Code No. FSQ-301）的5×RT Master Mix Ⅱ 及5×RT Master Mix Ⅱ no-RT Control 组成各不相同，请勿混用。