链cDNA合成试剂盒(预混试剂)

特别提示：包括链cDNA合成试剂盒(预混试剂)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：链cDNA合成试剂盒(预混试剂)
英文名称：PreMix 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix
产品货号：JN0004
产品规格：50次|100次

  本试剂盒是以mRNA或者总RNA为模板，GX合成链cDNA。本产品含有反转录反应所需的全部试剂（BalbScript Reverse Transcriptase，RNase Inhibitor，Oligo(dT)18，Random N6，dNTPs），浓度为2×。反应时只需要加入RNA模板和水即可，操作简单，降低操作过程中的污染。合成的链cDNA能直接用做PCR或荧光定量PCR的模板，以及第二链cDNA合成或线性RNA扩增的模板，也可用于放射性或非放射性核苷酸标记链cDNA的实验。

试剂盒组成：

组份	JN0004-50次
2×BalbScript PreMix 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix	500μl
RNase Free Water	1ml

注意事项：
1、用DEPC处理实验用到的所有器材，或者购买已经证明无核酸酶的实验用具，整个实验过程需戴手套并经常更换手套，避免RNA酶的污染。
2、确保所用试剂中无RNA酶污染。
3、试剂盒如不使用，要严格密封保存。在反转录过程中，所有管盖要确保扣严。
4、纯化过的RNA要保证不含有盐，金属离子，乙醇和*酚，因为以上成分会干扰链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀法去除痕量污染物。

实验步骤：

链cDNA合成:
1、融化后，将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。
2、按顺序加入下面的反应物

模板RNA	总RNA(0.1 ng -5μg) poly(A) mRNA(10 pg) 特异性RNA(0.01 pg)
2×BalbScript PreMix UltraMix	10μl
RNase Free Water	至20μl

3、可选优化步骤。如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构，可先将RNA模板和RNase Free Water混匀后，65℃孵育5分钟，冰上冷却后再加入其它组分。
4、轻柔混匀后离心，于42℃条件下孵育60分钟。 如果RNA模板中不含poly A结构，可先在25℃条件下孵育5分钟，随后转到42℃条件下孵育60分钟。
5、70℃加热5min终止反应。
反应产物可直接用于PCR反应，如果不立即使用，在-20℃可保存一周左右。如想延长保存时间，建议使用-70℃保存。

链cDNA的PCR扩增:
合成的链cDNA可直接用于PCR或qPCR。链cDNA反应液体积不能超过PCR反应体系的1/10。通常50 μl的PCR反应体系中，链cDNA反应液加入2μl。

储存条件：-20℃

除了链cDNA合成试剂盒(预混试剂),，我公司还供应以下相关产品：


BTN131212 PCR Mix染料 10mL
BTN70905 2%明胶溶液(PCR级) 1.5mL
BTN130923 LAMP扩增阳性对照 50次
YT373 YT Taq DNA聚合酶(Taq酶)(含buffer) 200U|1000U
WE0126 防污染多重PCR MasterMix(含UNG酶) 1ml
WE0153 快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(高含量ROX校正染料) 5ml
ALH223 Pfu DNA聚合酶 500U|3000U
RFT161 BSA溶液(PCR级) 5×1ml
SY0039 2×即用型PCR预混溶液(热启动高保真) 1ml
SY0048 dNTP混合溶液(25 mM each) 250ul
JN0003 链cDNA合成试剂盒(去基因组DNA) 50次|100次
JN0055 PCR增强剂Ⅱ 0.5ml×5
JN0061 RNA/单链DNA染料(SYBR Green) 500μl
QN0954 通用引物 ITS4 250μl(10uM)
QN0972 Taq Plus DNA Polymerase 500U|1000U
MT0021 一步法荧光定量RT-PCR MasterMix(TaqMan) 200T|5000T
MT0023 2×Strong Taq PCR Mix(含染料) 1ml|5ml|500ml
MT0034 5×PCR增强剂 1mL
QN2080 一步法RT-PCR试剂盒 50T|200T
WH0090 热启动Taq DNA聚合酶（含Taq单抗) 250U|500U