36401ES08 Protein A Agarose Beads 蛋白A琼脂糖珠_详细资料

产品信息

Protein A Agarose Resin 蛋白A琼脂糖纯化树脂
产品信息
产品名称
产品编号
规格
储存
价格（元）
Protein A Agarose Beads 蛋白A琼脂糖珠
36401ES08
5ml
4℃
546.00
Protein A Agarose Beads 蛋白A琼脂糖珠
36401ES25
25ml
4℃
2186.00
36401ES60
100ml
4℃
7426.00
产品描述
天然蛋白A（Protein A）是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白，与分离自G型或C型链球菌属的蛋白G类似，主要通过与免疫球蛋白（Ig）的Fc区相互作用，结合大多数哺乳动物的IgG，可用于多种抗体（单抗和多抗）的分离纯化。在与不用的免疫球蛋白亚类的结合特性上，ProteinA 和Protein G结合性能不太一样（详见附录1）。
本品使用的是基因改造后的蛋白A，不仅维持其本身的Ig亲和特性，同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合，Protein A Agarose Resin 以琼脂糖凝胶为基质，重组Protein A为配基，具有很高的物理化学稳定性。利用本品经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体，使用方便，应用广泛。
产品性质
基质（Matrix）
4%琼脂糖微球
配体（Ligand）
重组蛋白A
孔径（Bead size）
45-165µm
Z大流速（Flow_max）
0.1MPa, 1bar
储存缓冲液（Buffer）
含20%乙醇的1×PBS
载量（Capacity）
＞40mg human IgG/ml 基质
pH范围（pH range）
3-10
运输与保存方法
冰袋运输。4℃保存，2年有效。
需准备试剂
【注】：建议以下缓冲液在使用前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
结合/洗杂缓冲液：0.15M NaCl, 20mM Na₂HPO₄, pH7.0
洗脱缓冲液：0.1M甘氨酸，pH 3.0
中和液：1M Tris-HCl，pH 8.5

使用方法
【注】：上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗杂缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗杂缓冲液透析。
1 Protein A Agarose Resin的装填
将Protein A Agarose Resin装入合适的层析空柱中，注意避免产生气泡。
2 样品纯化
1）平衡：用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
2）上样：将样品加到平衡好的Protein A Agarose Resin中，保证目的蛋白与树脂充分接触，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待检测。
3）洗杂： 用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
4）洗脱： 使用 5-10 倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。
5）清洗及保存：依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，Z后再用5倍柱体积的 20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。
3 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。
4 树脂清洗
随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量下降，影响柱子的性能，这时需对柱子进行清洗：
1）去除沉淀或变性物质
① 用2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗；
② 用5倍柱体积的PBS，pH 7.4 清洗。
2）去除由于疏水性吸附造成的非特异吸附物质
① 用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗；
② 用5倍柱体积的PBS, pH 7.4 清洗。
注意事项
1）请勿冷冻保存本产品。
2）Protein A琼脂糖珠使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。
3）所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附录1. 蛋白A，G对不同物种Ig的结合能力总表
免疫球蛋白亚型
Protein A
Protein G
免疫球蛋白亚型
Protein A
Protein G
Human IgG
++++
++++
Mouse IgG
++++
++++
Human IgG1
++++
++++
Mouse IgG1
+
++++
Human IgG2
++++
++++
Mouse IgG2a
++++
++++
Human IgG3
+
++++
Mouse IgG2b
+++
+++
Human IgG4
++++
++++
Mouse IgG3
++
+++
Human IgM
Use anti-Human IgM
Mouse IgM
Use anti-Mouse IgM
Human IgE
NR
NR
Chicken IgG (IgY)
NR
NR
Human IgA
+
NR
Cow IgG
++
++++
Human IgA1
+
NR
Goat IgG
+
++
Human IgA2
+
NR
Goat IgG1
+
++++
Human IgD
Use anti-Human IgD
Goat IgG2
++++
++++
Rat IgG
+
++
Goat IgM
NR
NR
Rat IgG1
NR
+
Guinea Pig IgG
++++
++
Rat IgG2a
NR
++++
Guinea Pig IgG1
++++
++
Rat IgG2b
NR
+
Guinea Pig IgG2
++++
++
Rat IgG3
+
++
Hamster IgG
+
++
Sheep IgG
+
++
Horse IgG
++
++++
Sheep IgG1
+
++
Rabbit IgG
++++
+++
Sheep IgG2
+
++
Rabbit IgM
NR
NR
Sheep IgM
NR
NR
Rabbit All isotypes
+++
++
Pig IgG
+++
+++
Monkey IgG
++++
++++
Cat IgG
++++
+
Donkey IgG
++
++++
Dog IgG
++
+

(+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested;

附录2 常见问题与解答
问题
可能原因
推荐解决方法
柱子反压过高
筛板被堵塞
清洗或更换筛板
填料被堵塞
清洗填料
裂解液中含有微笑的固体颗粒，建议上柱前使用0.22µm/0.45µm滤膜过滤。
样品纯化过程中曲线不稳
样品或 buffer 中有气泡
赶出气泡
样品和buffer进行脱气
洗脱组分中没有目的蛋白
样品中抗体浓度太低
使用其抗原做配体的介质
抗体被降解
适当的提高洗脱pH
样品与Protein A结合力低
换用Protein G或Protein A/G树脂纯化
回收率逐渐减低
上样量太多
减少上样量
柱子太脏，载量降低
清洗树脂

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Z大流速（Flow_max）	0.1MPa, 1bar
储存缓冲液（Buffer）	含20%乙醇的1×PBS
载量（Capacity）	＞40mg human IgG/ml 基质
pH范围（pH range）	3-10

免疫球蛋白亚型	Protein A	Protein G	免疫球蛋白亚型	Protein A	Protein G
Human IgG	++++	++++	Mouse IgG	++++	++++
Human IgG1	++++	++++	Mouse IgG1	+	++++
Human IgG2	++++	++++	Mouse IgG2a	++++	++++
Human IgG3	+	++++	Mouse IgG2b	+++	+++
Human IgG4	++++	++++	Mouse IgG3	++	+++
Human IgM	Use anti-Human IgM		Mouse IgM	Use anti-Mouse IgM
Human IgE	NR	NR	Chicken IgG (IgY)	NR	NR
Human IgA	+	NR	Cow IgG	++	++++
Human IgA1	+	NR	Goat IgG	+	++
Human IgA2	+	NR	Goat IgG1	+	++++
Human IgD	Use anti-Human IgD		Goat IgG2	++++	++++
Rat IgG	+	++	Goat IgM	NR	NR
Rat IgG1	NR	+	Guinea Pig IgG	++++	++
Rat IgG2a	NR	++++	Guinea Pig IgG1	++++	++
Rat IgG2b	NR	+	Guinea Pig IgG2	++++	++
Rat IgG3	+	++	Hamster IgG	+	++
Sheep IgG	+	++	Horse IgG	++	++++
Sheep IgG1	+	++	Rabbit IgG	++++	+++
Sheep IgG2	+	++	Rabbit IgM	NR	NR
Sheep IgM	NR	NR	Rabbit All isotypes	+++	++
Pig IgG	+++	+++	Monkey IgG	++++	++++
Cat IgG	++++	+	Donkey IgG	++	++++
Dog IgG	++	+
(+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested;

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	填料被堵塞	清洗填料
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洗脱组分中没有目的蛋白	样品中抗体浓度太低	使用其抗原做配体的介质
	抗体被降解	适当的提高洗脱pH
	样品与Protein A结合力低	换用Protein G或Protein A/G树脂纯化
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