林可霉素试剂盒

林可霉素酶联免疫检测试剂盒
使用说明书一、检测原理
本试剂盒是利用竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被抗 林可霉素抗原。检测时，加入标准品或样品溶液，林可霉素抗体及酶标记物，包被抗原和加入样本中的林可霉素竞争性地与林可霉素抗体结合后，再与酶标记物形成抗原抗体复合物，用TMB底物显色；加入反应终止液，在450nm波长酶标仪下进行检测，样品中的林可霉素浓度与吸收光强度成反比。
二、检测范围
本试剂盒是应用ELISA技术研发的药物残留检测产品,与仪器分析技术比较，能经济、快速地检测出蜂蜜、鸡肉，牛奶等中的林可霉素。
三、交叉反应率
与类似物的交叉反应率：
林可霉素……………………………………………………
链霉素…………………………………………………1%
卡拉霉素……………………………………………………6.3%
庆大霉素……………………………………………………2.5%
泰乐菌素……………………………………………………0.1%
替米卡星……………………………………………………0.1%
其它抗生素药物交叉反应率均小于0.1%
四、试剂盒组成
酶标板1块，96孔/板
标准液6瓶（1ml/瓶）：
0 ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
抗体工作液 ………………………7ml
酶标浓缩液…………………………1ml
底物液A …………………………7ml
底物液B …………………………7ml
终止液   …………………………7ml
20X浓缩洗涤液  ………………40 ml
复溶工作液  ……………………50 ml
说明书 ……………………………1份
五、 需要但试剂盒中不提供的器材和试剂
（1）设备
……微孔板酶标仪(450nm)
……振荡器、离心机
……微量移液器：20μl～200μl,100μl~1000μl
……容量瓶：100ml，500ml，1000ml
（2）试剂
……甲醇、浓HCl
六、溶液的配制
样本前处理需配制：
配液1: 0.015M盐酸溶液             
         量取1.25ml浓盐酸加入到盛有去离子水的容器中定容至1L。
配液2: 甲醇－0.015M盐酸溶液
         量取10ml甲醇和60ml 0.015M 盐酸溶液混合均匀。
配液3：洗涤液
将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水稀释
20X浓缩洗涤液在使用前请按1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水）（可按需配置，稀释后的洗涤液可在4℃保存一个月）
七、样本前处理方法
样本处理前须知
    处理任何样本时，都须注意：
（1）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
   （2）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果。
样本前处理方法：
（A）禽类、水产组织样本（样本稀释倍数20）
1、用均质器均质组织样本；
2、称取2.0±0.05g均质物至50ml聚苯乙烯离心管中，加入10ml甲醇－0.015M盐酸溶液，用振荡器振荡5min；
3、4000转/分以上，室温（20-25℃）离心5min；
4、移取200ml上清液，加入600ml复溶工作液充分混匀；
5、取30ml用于分析。
（B）蜂蜜、蜂王浆（样本稀释倍数20）
1、称取2.0±0.05g蜂蜜至50ml聚苯乙烯离心管中，加入4ml去离子水，将蜂蜜全部溶解，置振荡器中振荡3min；
2、4000转/分以上，室温（20-25℃）离心5min；
3、取上层清液50 ml，加入450ml复溶工作液，充分混匀；
4、取30ml用于分析。
（C）奶粉样本处理方法：（样本稀释倍数20）
1、称取2.0±0.05g奶粉样本至50ml离心管中，加入4ml甲醇，充分振荡，室温4000转/分以上，室温（20-25℃）离心5分钟。
2、取50µl上清液，再加入450µl复溶工作液，充分混匀；
3、取30µl用于分析。
八、酶联免疫检测步骤
测定前须知：
1、使用之前将所有试剂和需用微孔板回升至室温。
2、使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。
3、在使用中不要让微孔干燥。
4、在ELISA分析中的重复性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
5、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用该板膜盖住微孔板。
测定步骤：
1、 将所需试剂从冷藏环境中取出，在室温下平衡30分钟，每种液体使用前均须摇匀。注意标准液均需做2个平行试验。
2、 抗体工作液和酶标浓缩液混合：将抗体工作液和酶标浓缩液按10:1体积比混合均匀（即 1000ml 抗体工作液+100ml酶标浓缩液，此混合液现配现用，不能保存）
3、 加30ml标准品或样品，于对应微孔中，再加60μl抗体工作液和酶标浓缩液混合液，用膜盖好，25℃下避光反应30分钟。
4、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，加洗涤液 250ml/孔，每次浸泡15~30秒，充分洗涤4－5次，用吸水纸拍干。
5、显色：每孔先各加入底物液A 50μl，再各加入底物液B 50μl，轻轻晃荡混匀，并在25℃下避光反应15分钟。
6、读数：每孔各加50μl终止液，在酶标仪于450nm处测定OD值（建议用450/630nm双波长检测，在5分钟内读完数据）。
九、结果分析
所测得的标准液或样品吸光度的平均值（B）除以一个标准液（0标准液）的吸光度（B0）值再乘以，得到百分吸光度值。
百分吸光度值（%）＝B/B0 ×
以标准品浓度的10为底的对数为X轴， 百分吸光值为Y轴，绘制标准曲线。将样本的百分吸光值代入标准曲线，从标准曲线上读出样本所对应的值，作为10的幂，乘以稀释倍数，即为样品中所含林可霉素的量。
利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样品的准确、快速分析。
十、试剂盒灵敏度、准确度、精密度
试剂盒灵敏度：0.1ppb
样本Z低检测限：
       禽类水产、组织样本…………………………………2ppb
       蜂蜜、蜂王浆样本……………………………………2ppb
       奶粉样本………………………………………………2ppb
回收率：
禽类、水产组织样本………………………………85±10%
       蜂蜜、蜂王浆样本………………………… 90±10%
       奶粉样本……………………………………………90±10%
精密度：
 试剂盒的变异系数均小于10%
十一、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20-25℃）
会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准
曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应
立即进行下一步操作。
3、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。如不慎滴漏到皮肤上，请尽快用水冲洗。
4、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
5、保存试剂盒于2-8℃，不要冷冻，将不用的微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
6、显色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450nm）值小于0.5（A450nm<0.5 ）时，表示试剂可能变质。
7、在加入底物液后，一般显色15分钟即可。若颜色较浅，可延长反应时间到20分钟（或更长），但不得超过30分钟。反之，则减短反应时间。
8、该试剂盒反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
十二、贮藏条件及保存期
贮藏条件：在2～8℃保存试剂盒
保存期：本试剂盒有效期为12个月。