Calu-6细胞,人肺癌细胞 现货复苏冻存
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细胞在运输、转移过程中,请勿打开自封袋;拿放细胞时请持瓶体,切勿在非无菌环境中碰触、拧动瓶口封口膜位置
进入生物安全柜前,打开自封袋拿出培养瓶,喷上酒精放进操作台(不建议使用酒精棉球擦拭),撕开封口膜后,用酒精灯外焰对瓶口烧灼一圈(3秒左右)
细胞冻存如下:
1.细胞:选对数生长期细胞,收集细胞24小时前换液一次。
2.计数:按常规方法把细胞制成细胞悬液,计数,令细胞密度达5×106/ml,离心去上清,吸入离心管中。
3.冻存液:先用培养液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO冻存液,按上法一滴滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。
4.分装:分装入无菌安剖中,每安剖加1.5毫升细胞悬液。
5.封口:用塑料安剖时拧紧瓶口即可;如用火焰封闭安剖口后,仔细检查,定要封严,必要时可浸入蓝色液中观察,为安全起见,把安剖缝入纱布小袋中,以防液氮浸入后,融解时因受热发生爆炸伤人;纱袋一端系以线绳,末端扎有小Pai,注明:细胞名称,冻存日期,以便日后查找。
竖立培养瓶,拧开瓶盖(如是贴壁细胞,请用真空泵或吸管移除原配培养基,切勿让瓶口处的液体回流进瓶内)
更换为含10%-20%血清的完全培养基,严格按照无菌操作要求继续培养
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