过表达质粒构建

基因过表达是将某个基因大量表达的过程。这个过程可以是在基因原本所在的细胞中，也可以是在其它表达系统中进行。其基本原理是通过人工构建的方式在目的基因上游加入调控元件，使基因可以在人为控制的条件下实现大量转录和翻译，从而实现基因产物的过表达。

现在有很多成熟的表达系统用于基因过表达，常用的包括：大肠杆菌表达系统，酵母表达系统，昆虫表达系统，哺乳动物细胞表达系统和体外翻译系统（无细胞体系）。虽然这些系统各不相同，但过表达的基本步骤相似。

基因过表达的目的一般有两种，一是获取大量的目的基因产物，二是研究目的基因产物的生物学功能。为了研究某一个基因产物的功能，可以在体内（一般是在这个基因本来所在的细胞中）将这个基因过表达，检测细胞的生理学变化。它和基因敲除是研究基因功能的两个重要手段。

实验步骤：

（1）钓取目的基因；

（2）目的基因与特定载体连接，载体种类依据表达系统差异而不同；

（3）将克隆导入表达细胞中。在大肠杆菌，酵母和哺乳动物细胞中，构建的外源质粒直接导入细胞即可，这个过程称为转化或转染。在哺乳动物细胞体系中，转染进入细胞内的外源基因在其上游强启动子的作用下可以直接过量表达。在大肠杆菌系统中，需要加入额外的诱导剂（常用IPTG）诱导表达，酵母系统中有的也需要诱导表达（例如甲醇诱导）。