miRNA 过表达质粒构建
miRNA过表达载体是根据客户需要,将完整的Pre-miRNA表达框克隆于II型或III型启动子的下游,通过转染的方式将载体导入培养细胞,转录出Pre-miRNA进而加工成成熟的miRNA,模拟内源性miRNA发挥调控效应和功能。
1 、服务流程:
a) 提供您所需要构建miRNA名称,miRbase登录号或者序列,由我公司专业技术人员进行实验设计并给出报价;
b) 签订miRNA质粒载体构建合成合同,支付预付款;
c) 设计合成引物, PCR反应扩增及PCR产物酶切;
d) 将酶切产物纯化,克隆至miRNA表达质粒载体系统;
e) 通过DNA测序,确认插入片段的准确性;
f) miRNA表达载体合成结束,发货并向客户提供实验报告。
2 、提供结果
a)质粒;
b) 测序图谱/序列;
c) miRNA载体构建报告书。
miRNAYZ剂(Anti-miRNA)表达载体
根据客户需要,将含有一个或多个miRNA结合位点的序列克隆于II型或III型启动子的下游,通过转染的方式将载体导入培养细胞,转录出含miRNA结合位点的RNA序列,可特异、GX地YZ生物体内源性miRNA的活性,以进行功能缺失性研究,是研究miRNA功能的必要工具。
1 服务流程:
a) 提供您所需要构建miRNA名称,miRbase登录号或者序列,由我公司专业技术人员进行实验设计并给出报价;
b) 签订miRNAYZ表达质粒载体构建合成合同,支付预付款;
c) 设计合成引物, PCR反应扩增及PCR产物酶切;
d) 将酶切产物纯化,克隆至miRNAYZ表达质粒载体系统;
e) 通过DNA测序,确认插入片段的准确性;
f) miRNAYZ表达质粒合成结束,发货并向客户提供实验报告。
2 提供结果
a)质粒;
b) 测序图谱/序列;
c) miRNAYZ表达质粒载体构建报告书。
miRNA 荧光素酶质粒构建
Biomics构建您所要研究的miRNA靶基因3’UTR区域,您只需将miRNA mimics与构建好的靶基因载体共转,即可检测miRNA是否对靶基因有调控作用。 当您需要筛选与疾病相关的miRNA时,只须将疾病基因的3’UTR报告载体与miRNA文库共转,即可获得大量可靠的miRNA调控信息,GX,准确。
1 服务流程:
a) 提供您所需要构建的基因名,GeneBank登录号或者基因3’UTR序列信息,由我公司专业技术人员根据序列具体情况设计实验方案并给出报价;
b) 签订3’UTR质粒载体构建合同,支付预付款;
c) 设计合成3‘UTR克隆引物,PCR反应扩增及PCR产物酶切;
d) 将PCR酶切产物纯化,克隆至报告基因检测系统;
e) 通过DNA测序,确认插入片段的准确性,完成实验;
f ) 载体构建完成后,发货并向客户提供实验报告。
2 提供结果
a) 装载靶基因3’UTR的质粒;
b) 测序图谱/序列;
c) 载体构建报告书。
3 备注
客户需准备荧光照度计及双荧光素酶检测试剂盒。
miRNA靶位点预测工具
miRNA的研究意义之重大是毋庸置疑的。然而,与新的miRNA的频频发现相比,miRNA的功能研究相对缓慢。到目前为止,在发现的4449多个miRNA中,确定功能的miRNA仅有几十个。导致miRNA功能研究进展缓慢的非常重要的原因是miRNA的作用靶标难以确定。事实上,通过实验方法确定miRNA的作用靶标非常耗时,目前尚无高通量的靶标鉴定方法。因此,通过理论方法预测miRNA的作用靶标成为当前识别miRNA作用靶标的较为理想的途径。以下ZD介绍几种经典预测软件的算法分析,其他软件(见下表)请查看相应网站。
靶序列预测工具 | 适用物种 | 链接 |
EMBL | 果蝇 | http://www.russell.embl-heidelberg.de/miRNAs |
miRanda | 果蝇,脊椎动物 | http://microrna.org/miranda.html |
PicTar | 脊椎动物,果蝇 | http://pictar.bio.nyu.edu |
TargetScan | 脊椎动物 | http://genes.mit.edu/targetscan |
RNA hybrid | 果蝇 | http://www.techfak.uni-bielefeld.de/persons/marc/mirna/targets |
ViTa | 病毒 | http://vita.mbc.nctu.edu.tv |
miTargert | 动物 | http://cbit.snu.ac.kr/~miTarget |
MiRTif | 动物 | http://mirtif.bii.a-star.edu.sg |
miRacle | 动物 | http://miracle.igib.res.in/miracle |
microTar | 动物 | http://tiger.dbs.nus.edu.sg/microTar |
EIMMo | 人,果蝇,线虫,斑马鱼 | http://www.mirz.unibas.ch/ElMMo |
miRU | 植物 | http://bioinfo3.noble.org/miRNA/miRU.html |
DIANA-MicroT | 人,鼠 | http://diana.pcbi.upenn.edu/DIANA-microT |
RNA22 | 动物 | http://cbcsrv.watson.ibm.com/rna22.html |
MicroInspector | 动植物、病毒 | http://mirna.imbb.forth.gr/microinspector |
TarBase | 实验验证miRNA靶基因 | http://www.diana.pcbi.upenn.edu/tarbase.html |
资料下载:
RNAi技术手册.pdf
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