通用型RT-qPCR试剂盒(适用于探针法荧光定量RT-PCR)

特别提示：包括通用型RT-qPCR试剂盒(适用于探针法荧光定量RT-PCR)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：通用型RT-qPCR试剂盒(适用于探针法荧光定量RT-PCR)
英文名称：One-Step Probe RT-qPCR Kit
产品货号：BTN190504
产品规格：100T

本试剂盒是基于荧光探针检测的即用型RT-PCR试剂盒，可以对靶RNA分子进行实时定量RT-PCR分析。试剂盒含有经过优化的缓冲液组分、逆转录酶、热启动Taq DNA聚合酶、Taq DNA稳定剂、dNTPs、MgCl2和稳定剂等所有实时定量RT-PCR所需要的成分，用户只需加入RNA模板、引物和探针即可进行探针法实时定量RT-PCR反应，具有广泛的用途。

试剂盒特点：
1．以2×Mix提供，用户只需准备模板、引物、探针和ROX染料（取决于qPCR仪器）即可以进行探针法实时定量RT-PCR实验，非常方便快捷，降低了操作误差。
2．各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。灵敏度时可以达到50拷贝/反应（跟模板质量，引物设计等相关）。
3．既可用于TaqMan探针qRT-PCR，也可以是分子信标（molecular beacon）的qRT-PCR。
4．灵敏度和专一性比染料法荧光定量RT-PCR更高。
5．可用于基因表达分析、SNP分析、拷贝数分析等实验。也可以用于定性检测。
6．本产品只能用于科研，1mL足够100次20μL体系的探针法qRT-PCR反应。

试剂盒组成：

组分	规格
2×探针法RT-qPCR缓冲液	1 mL
5×探针法RT-qPCR酶混合液	0.2mL

保存：-20℃保存,不冻融时保存期限为12个月。如果需要每天使用，可在4℃放置三周。

使用方法：
1．如果有N个样品并且做定量分析，Z好设置N+7个反应，多出的7个中，6个是做标准曲线的阳性对照，一个是阴性对照（NC）。在N+7个 PCR管中，加入下列成分。如果是做定性分析，则6个做标准曲线的样品缩减成一个阳性对照（PC），用户自己需要根据下表进行适当修改（把6个标曲反应改成1个阳性对照反应）。

成分	样品管	6个标准管	NC管
2×探针法RT-qPCR缓冲液	10μL	10μL	10μL
自备引物1（10μM）	1μL	1μL	1μL
自备引物2（10μM）	1μL	1μL	1μL
自备模板RNA	1-2μL	-	-
自备阳性对照模板	-	各1μL	-
超纯水	-	-	1μL
自备探针（0.5μM）	1μL	1μL	1μL
自备50×ROX(依PCR仪选择性加入)	0.4μL	0.4μL	0.4μL
5×探针法qRT-PCR酶混合液	2μL	2μL	2μL
补超纯水到	20μL	20μL	20μL

2．放入荧光PCR仪中进行扩增,下表的扩增参数仅供参考，一定需要根据靶分子长度，引物和探针的Tm值、标记染料的种类等进行调节。一般选择三步法PCR：

过程	温度	时间
逆转录	94℃	30分钟
预变性	94℃	2分钟
PCR反应（35-45次循环）	94℃	15秒
	55-65℃	15-30秒(在此步采集荧光信号，通道根据标记染料决定)
	72℃	30秒

如果引物Tm值接近60℃，也可以选择两步法PCR：

过程	温度	时间
逆转录	94℃	30分钟
预变性	94℃	2分钟
PCR反应（35-45次循环）	94℃	15秒
	60℃	30-60秒(在此步采集荧光信号，通道根据标记染料决定)

3．数据处理
如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性。一般情况下，阴性对照Ct大于或等于40（阈值需要以阴性对照的Ct值确定，此处为便于叙述以40为例，具体情况很可能阈值不一样）。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。

我公司销售的通用型RT-qPCR试剂盒(适用于探针法荧光定量RT-PCR)，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。