细胞名称: 人直肠成纤维细胞
种属来源: 人
组织来源: 手术切除的正常直肠组织
疾病特征: 正常原代细胞
细胞形态: 成纤维细胞样
生长特性: 贴壁生长
培养基: 人直肠成纤维细胞推荐使用EliteCell原代上皮细胞培养体系
作为体外培养原代肝内胆管上皮细胞的培养基。
生长条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%; 温度:37 ℃,
传代方法: 1:2至1:6,每周2次。
冻存条件: 90% 完全培养基+10% DMSO,液氮储存
细胞鉴定: 纤维连接蛋白(Fibronectin)或波形蛋白(Vimentin)免疫荧光染色为阳性, 经鉴定细胞纯度高于90%。
QC检测: 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
特点和简介直肠是自肛缘起向上15cm的一段大肠。直肠周围多脂肪、无纵带,位于膀胱和生殖器官的背侧。
直肠横切面由内到外依次为:粘膜(上皮层,固有层,粘膜肌层),粘膜下层,肌层,外膜。
成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分,肿瘤间质对肿瘤的发SF展有着重要作用。成纤维细胞是肿瘤间质的重要组成成分,与肿瘤复发、转移等密切相关。肿瘤间质中成纤维细胞活化为癌相关成纤维细胞是肿瘤细胞-成纤维细胞相互作用过程中的一个重要过程,是成纤维细胞发挥肿瘤调节作用的关键。同时成纤维细胞的变化也与许多其他直肠疾病密切相关。
接受后处理1) 收到
人直肠成纤维细胞后,请检查是否漏液 ,如果漏液,请拍照片发给我们。
2) 请先在显微镜下确认细胞生长 状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3) 弃去T25瓶中的培养基,添加 6ml本公司附带的完全培养基。
4) 如果细胞密度达80%-90%请及 时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
5) 接到细胞次日,请检查细胞是 否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
培养操作1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
培养注意事项1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现 象发生请及 时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子 等,确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题,
人直肠成纤维细胞责任由客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶 壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常, 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活 力,请拍下 照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4. 静置细胞贴壁后,请将细胞瓶内的培养基倒出,留 6~8mL 维持细胞正常培养,待细 胞汇 合度 80%左右时正常传代。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞 传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术 部 沟通交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联 系,告知细胞的具体情况,以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。
资料下载:
人直肠成纤维细胞.docx
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