非标记磷酸化蛋白质组学定量(Pho-Label free)
蛋白质磷酸化:指由蛋白质激酶催化的把ATP的磷酸基转移到底物蛋白质氨基酸残基(丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸)上的过程,或者在信号作用下结合GTP,是生物体内一种普通的调节方式,在细胞信号转导的过程中起重要作用。
蛋白质发生磷酸化是重要的翻译后修饰,它与信号传导、细胞周期、生长发育以及癌症机理等诸多生物学问题有密切关系。研究蛋白质磷酸化对阐明蛋白质功能具有重要意义。
蛋白质磷酸化组学运用磷酸化肽特异性富集方法联合非标定量技术,对组学水平的磷酸化肽进行定性定量分析。
技术原理
本公司将磷酸化(Phospho-rylation)肽段TiO2富集技术和蛋白质非标记定量技术(label-free)相结合,实现对磷酸化蛋白质组学的定性、定量研究。其中富集手段包含了公司技术团队多年相关领域经验技术,可有效保证磷酸化肽的超高富集率。
实验流程
磷酸化-非标实验流程:
1.收集不同组别的样本并分别提取蛋白质,评估样本状态、蛋白含量是否充足,后续设计实验给出建议;
2.蛋白质经过还原,封闭后用胰蛋白酶酶切;
3.TiO2富集(博士团队特有技术优化、保证富集率;
4.Thermo Scientific Q Exactive高灵敏质谱检测;
5.专业生物信息团队定制经典及个性化服务
技术优势
1.专业相关领域技术支持团队;
2.经验丰富的实验操作人员,富集效率>90%;
3.独立研发改进的具有技术领先地位的操作方法;
4.动物植物多种案例经验累积;
5.强大的生物信息分析团队。
应用领域
科研: 研究特定疾病发生的遗传变异,如单基因遗传病、罕见疾病基因检测等。
临床: 用于癌症易感位点检测、单基因遗传位点检测、心脑血管用药指导基因检测等。
健康: 用于疾病预防及管理,生活方式指导等相关的大众消费基因检测。
农业: 用于品系鉴定、优势性状筛选、群体遗传学分析、亲缘关系分析等。
动植物: 动植物生长发育、抗病、抗逆机制研究以及育种研究。同时可实时更新和补充关联信息的完整性。
医学: 阐释疾病的发SF展机制,发现与疾病相关的生物标志物, 以应用于疾病诊断、ZL、预后及用药研究。
平台介绍
Thermo Scientific Orbitrap Fusion Lumos Tribrid 三合一质谱仪是行业领先的高性能质谱仪,采用全新的高容量离子传输管(HCTT)、电动离子漏斗(EIF)、先进的四极杆技术(AQT)、先进的真空技术(AVT)和 ETD HD,进一步提高灵敏度。
新型 Orbitrap Fusion Lumos MS 功能
▪ 新型高灵敏度 API 接口将高容量离子传输管和电动离子漏斗结合,旨在提高离子流,降低检测限
▪ 先进的主动离子束传输组件(Advanced Active Beam Guide)可防止中性粒子和高速离子簇进入解析离子的四极杆中
▪ 先进的四极杆技术结合高灵敏度和离子传输效率,使选中离子从分离窗口ZX穿过
▪ 先进的真空技术提高了向 Orbitrap 分析仪传输高分子量离子的速度
▪ 全新的 ETD HD—高动态范围 ETD 显著提升了碎片离子覆盖范围
成熟的 Tribrid MS 功能
▪ Tribrid 三合一结构—包括四极杆质量过滤器、线性离子阱和 Orbitrap 质量分析器
▪ 高达 500,000 FWHM 的超高分辨能力,质荷比为 200 时的同位素分辨率高达 240,000 FWHM
▪ Orbitrap 和线性离子阱 MS 的采集速率高达 20 HzMSn分析
▪ MS 和 MSn 完全并行化使用智能 ADAPT™(所有动态可用并行时间)技术进行分析
▪ MS 和 MSn 的同步离子选择 (SPS)实验不仅显著提高识别的多肽和蛋白质数量,还能提高定量分析的准确性(当使用同量异序质量标记时)
▪ 裂解的灵活性 — CID、HCD 和可选 ETD 和 EthcD,在 MSn 的任何阶段采用Orbitrap 或线性离子阱检测时均可使用上述功能,以测定代谢物、聚糖和其他小分子的详细结构
▪ 通用方法适用于大部分肽段鉴定,无需针对浓度未知的样品进行方法优化,从而降低了常规肽段实验所需的样品和仪器时间要求
▪ 直观、灵活的拖放式用户界面简化了方法开发,可实现独特而复杂的工作流程
样品要求
1.细胞样品:细胞量>108个;
2.组织样品:动物、微生物组织湿重>10mg;植物鲜嫩组织>100mg。