iTRAQ标记定量蛋白质组学技术

iTRAQ标记定量蛋白质组学技术
iTRAQ技术是由美国应用生物系统公司(Applied Biosystems Incorporation，ABI)2004年开发的同重标签标记的蛋白相对定量技术。该技术采用4种或8种同位素的标签，通过特异性标记多肽的氨基基团，然后进行串联质谱分析，可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量。

技术原理

 iTRAQ标记试剂由三部分组成：报告基团、质量平衡基团和肽反应标记试剂基团，形成4种或8种相对分子质量均等量（145或305）的异位标签。

iTRAQ标记试剂结构示意图
 

报告部分：8标质量数分别为113~121Da（无120），4标质量数为114-117Da，因此iTRAQ最多可同时标记8组样品（客户可按需选择标记个数）。

肽反应部分：能与肽链N端及赖氨酸侧链发生共价连接，从而将报告部分和平衡部位标记到肽段上，几乎可以标记所有蛋白质。

平衡部分：8标质量数分别为192-184（无185），4标质量数31~24Da，与报告部分相互配合，组成恒定质量数为305或145Da，保证iTRAQ试标记的不同样本的同一肽段具有相同的质荷比。

iTRAQ实验流程图
 

iTRAQ试剂是可与氨基（包括氨基酸N端及赖氨酸侧链氨基）连接的胺标记同重元素。在一级质谱图中，任何一种iTRAQ试剂标记不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比。在一级质谱中，不同来源的相同肽段表现为一个峰；在二级质谱中，iTRAQ试剂中的平衡基团发生中性丢失，信号离子表现为不同质荷比(114～121)的峰，因此根据波峰的高度及面积，可以得到同一蛋白在不同样本中的表达差异；同时，肽段的MS/MS结果结合数据库检索可以鉴定出相应的蛋白种类。

技术路线

技术优势

• 灵敏度高：可检测出低丰度蛋白；
• 分离能力强：可分离出酸/碱性蛋白，小于10KD或大于200KD的蛋白、难溶性蛋白等；
• 适用范围广：可以对任何类型的蛋白质进行鉴定，包括膜蛋白、核蛋白和胞外蛋白等；
• 高通量：可同时对8个样本进行分析，特别适用于采用多种处理方式或来自多个处理时间的样本的差异蛋白分析；
• 结果可靠：定性与定量同步进行，同时给出每一个组分的相对表达水平、分子量和丰富的结构信息；
• 自动化程度高：液质连用，自动化操作，分析速度快，分离效果好。

应用领域

• 科研: 研究特定疾病发生的遗传变异，如单基因遗传病、罕见疾病基因检测等。
• 农业: 用于品系鉴定、优势性状筛选、群体遗传学分析、亲缘关系分析等
• 动植物: 动植物生长发育、抗病、抗逆机制研究以及育种研究。同时可实时更新和补充关联信息的完整性
• 医学: 阐释疾病的发SF展机制，发现与疾病相关的生物标志物， 以应用于疾病诊断、ZL、预后及用药研究。

仪器型号

Thermo Scientific Q Exactive、AB SCIEX Triple TOF^TM fusion plus

咨询电话：010-58418483