提供商：
上海厚基生物科技有限公司
服务名称：
iTRAQ标记定量蛋白质组学分析
规格：
个
iTRAQ标记定量蛋白质组学分析
1.概述
iTRAQ (isobaric tags for relative and absolute quantitation)技术是由AB SCIEX公司研发的一种基于体外等重同位素标记的相对与JD定量技术。该技术利用4种或8种同位素试剂标记多肽末端氨基或赖氨酸侧链氨基基团，经高精度质谱仪串联分析，可同时比较多达8种样品之间的蛋白质表达量，是近来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术。
2.技术原理
图1 iTRAQ试剂结构（以4标iTRAQ试剂为例）
iTRAQ试剂由三部分组成：报告基团（4标实验相对分子质量分别为114、115、116和117；8标实验相对分子质量分别为113、114、115、116、117、118、119和121），质量平衡基团（4标实验相对分子质量分别为31、30、29 和28；8标实验相对分子质量分别为192、191、190、189、188、187、186和184）和肽反应标记试剂基团。其中每一种报告基团及其对应的平衡基团的总分子质量均为145Da（4标试剂）或者305Da（8标试剂）。
iTRAQ试剂是可与氨基酸末端氨基及赖氨酸侧链氨基连接的胺标记等重元素(isobaric)。在质谱图中，任何一种iTRAQ试剂标记的不同样本中同一蛋白质表现为相同的质荷比。在串联质谱中，报告基团、质量平衡基团和多肽反应基团之间的键断裂，质量平衡基团丢失，带不同同位素标签的同一多肽产生4种或8种不同质量的报告离子（图2中红色框标记），根据报告离子的丰度可获得样品间相同肽段的定量信息，再经过软件处理得到蛋白质的定量信息。
图2 iTRAQ实验中某肽段的二级质谱图示例
3.技术优势
(1)灵敏度高，检测限低，可检测出低丰度蛋白；
(2)分离能力强，分析范围广，iTRAQ可以对任何类型的蛋白质进行鉴定，包括高分子量蛋白质、酸性蛋白、碱性蛋白、膜蛋白和不溶性蛋白。
(3)能同时对8个样本进行分析，提高了实验通量，可同时对多个时间点或不同处理的蛋白质进行分析；
(4)结果可靠：可减少样本处理以及不同组上机造成的实验误差，定性与定量分析结果更加可靠；
(5)自动化程度高：液相与质谱连用，自动化操作，分析速度快。
4.应用领域
(1)疾病分子标志物筛选
(2)作用机制研究
(3)植物抗逆机制研究
(4)药物作用靶点研究
(5)特殊功能蛋白质筛选
5.实验流程
注释：“样品及实验预判”包括定量、SDS-PAGE测试、酶解和质谱分析，对样品质量及样品之间的平行性进行初步判断。
6.服务流程，质量控制及周期
整个实验分为预实验和正式实验部分，总实验周期为6周。
预实验部分包括：蛋白质样品制备、蛋白质定量、SDS-PAGE胶图、蛋白质酶解、质谱预实验、出具预实验报告，预实验主要是为了确保蛋白质和肽段样品符合正式实验的要求。
正式实验部分包括：iTRAQ标记标记、SCX色谱分级、正式实验质谱分析、数据库检索、生物信息学分析以及出具正式实验报告。
7.仪器平台
Q Exactive HF-X质谱仪 Obitrap Fusion Lumos质谱仪
8.交付结果
①Excel表格：蛋白质、肽段鉴定列表以及蛋白质定量和差异分析列表；
②生物信息学分析：GO和KEGG富集分析、PPI（蛋白质相互作用）、火山图、聚类热图以及一些个性化分析，如下图所示；
③项目报告 ；
④RAW文件；
9.样品要求
资料下载：
iTRAQ定量蛋白质组学_丁香通_20180920.docx
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