金开瑞拥有较齐全的cDNA文库，通过将已知基因作为诱饵，从选定的文库中筛选出与诱饵蛋白/诱饵序列存在特异相互作用的蛋白，材料用量少，获得全长的比例高。
技术应用
酵母双杂交系统因其具有灵敏性高，功能强大，适应范围广等特点，现已被广泛应用于多个研究领域。
1、将已知基因作为诱饵，在选定的cDNA文库中筛选与诱饵蛋白相互作用的蛋白；
2、一对已知蛋白相互作用研究；
3、蛋白相互作用结构域和位点的研究；
4、建立基因组蛋白连锁图。
5、酵母单杂交技术是Li在酵母双杂交的基础上发展而来的一种研究核酸-蛋白相互作用的工具，被广泛用于研究真核细胞内基因的表达调控，如鉴别DNA结合位点发现潜在的结合蛋白基因、分析DNA结合结构域信息等。
服务优势
采用Clontech SMART专利技术，以总RNA为模板，用SMART方法反转录成cDNA，材料用量少，获得全长的比例高。
服务流程
1、酵母单/双杂交文库构建
接收订单及样品——总RNA提取——mRNA纯化——反转录——双链cDNA合成及纯化——共转至酵母感受态细胞（改造的Y1H)——转化效率测定——文库效价测定——结果交付
2、酵母单杂交文库筛选
接收订单及样品——诱饵载体及诱饵菌株构建——自激活检测——克隆数计算——阳性克隆菌株鉴定——结果交付
3、酵母双杂交文库筛选
接收订单及样品——诱饵载体的构建——毒性检测——测定杂交效率——阳性克隆菌株鉴定——结果交付
服务内容及说明 | 服务项目 | 客户提供 | 交付 |
| 文库构建 | 组织/细胞 | 滴度在1×108以上的酵母文库菌液；文库PCR鉴定结果图片（阳性率在80%左右） |
| 文库筛选 | | 筛选过程中的全部原始图片；筛选获得所有相互作用的猎物蛋白的测序结果 |
针对酵母单杂交实验结果，可作进一步验证：
| 服务内容 | 实验目的 | 细分 | 周期（工作日） |
| EMSA | 验证启动子和蛋白互做 | 探针合成及标记 | 10 |
| EMSA实验 | 20 |
| 双萤光素酶检测 | 验证启动子和蛋白互做 | 载体构建 | 10-15 |
| 双萤光素酶检测 | 25 |
注：1. 双萤光素酶检测默认使用293T细胞，使用其他细胞视培养及转染难度议价；
2. 双萤光素酶检测启动子-转录因子验证默认1个转录因子 + 启动子序列WT和Mut各1个；microRNA靶基因验证默认1个microRNA + 靶序列WT和Mut各1个，超过以上组合数量请询价。
酵母双杂交
| 服务项目 | 客户提供 | 交付 |
| 文库构建 | 组织/细胞 | 滴度在1×108以上的酵母文库菌液；文库PCR鉴定结果图片（阳性率在90%左右） |
| 文库筛选 | 蛋白序列/基因序列/质粒 | 筛选过程中的全部原始图片；筛选获得所有相互作用的猎物蛋白的测序结果 |
针对酵母双杂交实验结果，可作进一步验证：
| 服务内容 | 实验目的 | 细分 | 周期（工作日） |
| Co-IP | 验证蛋白互做 | / | 20 |
| GST pull-down | 验证蛋白互做 | GST pull-down+WB/银染 | 20 |
沪公网安备 31011502008050号
