特别提示:包括超纯RNA提取试剂盒(DNase I)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床YL及其他非科研用途!
产品名称:超纯RNA提取试剂盒(DNase I)
英文名称:SuperPure RNA Extraction Kit(DNase I)
产品货号:WE0193
产品规格:50次
本试剂盒是基于TRIzon改进后的柱式总RNA提取试剂盒,本制品可以从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。首先裂解液充分裂解并匀质化样本,在特有的高盐状态下,RNA特异性地与硅基质结合,在极大程度减少了蛋白污染的同时有效去除了有机溶剂的污染,得到的RNA纯度更好,质量更高。本产品可从各细胞或组织中快速提取总RNA,每次可处理 30-50 mg组织或 5×106 细胞,可同时处理多个不同样品。如果是对微量DN非常敏感的RNA实验,残留的DNA可利用无RNase的DNase在柱上进行消化去除,提取后的RNA可直接应用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。
试剂盒组成:
组份 | 50次 |
DNase I | 1000 U |
10×Reaction Buffer | 1000μl |
TRIzon Reagent | 60ml |
Buffer RW1 | 40ml |
Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
RNase-Free Water | 10ml |
吸附柱RM及收集管 | 50套 |
RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
保存条件:DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存,TRIzon Reagent 2~8℃避光保存,其它组分室温(15~30℃)。
自备试剂:lǜ仿(新开封或提取RNA专用)、70%乙醇(无RNase水配制)、无水乙醇。
实验前准备及重要注意事项:
1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)配制溶液应使用无RNase的水。
3)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2、样品应避免反复冻融,否则影响RNA提取得率和质量。
3、使用前若发现TRIzon Reagent有沉淀,可置于56℃水浴几分钟,即可溶解。
4、次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,且所有
操作步骤动作要迅速。
操作步骤:
1、样品处理
① 组织:30-50 mg组织在液氮中充分研磨后加入1ml TRIzon Reagent,或在组织样品中加入1ml TRIzon Reagent后匀浆处理。
注意:样品体积不超过TRIzon Reagent体积的10%。
② 单层培养细胞:吸去培养液,加入适量 ,每10cm2加入1ml TRIzon Reagent。
③ 细胞悬液:离心收集细胞。每5×106细胞加入1ml TRIzon Reagent。
2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次,使样本充分裂解。室温放置5分钟,使蛋白核酸复合物完全分离。
3、以每1ml TRIzon Reagent加入200μllǜ仿的比例加入lǜ仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置2分钟。
4、4℃ 12000rpm(~~13400×g)离心10分钟,此时样品分为三层:红色有机相,中间层和上层无色水相,RNA主要在上层水相中,将上层水相移到一个新的RNase-Free离心管(自备)中。
5、在得到的水相溶液中加入等体积的70%乙醇(无RNase水配制),颠倒混匀。
6、将上步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中。若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心20秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1,12000rpm离心20秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
8、配制DNase I 混合液:取52μl RNase-Free Water,向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl),混匀, 配制成终体积为80μl的反应液。
9、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液,20-30℃孵育15分钟。
10、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1,12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
11、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心20秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
12、重复步骤11。
13、12000rpm离心2 分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
14、将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中,向吸附柱的中间部位加入30-50μl RNase-Free Water,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。
注意:
1)RNase-Free Wate体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤14。
3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤14。
储存条件:室温(15~30℃)。
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温馨提示:不可用于临床ZL。