特别提示:包括一步法(快速/无缝)克隆试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床YL及其他非科研用途!
产品名称:一步法(快速/无缝)克隆试剂盒
英文名称:One Step Pcr Cloning Kit
产品货号:SY0279
产品规格:25T
一步法(快速/无缝)克隆试剂盒是一款简单、快速、GX的DNA定向克隆产品,该试剂盒可以将PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点,可GX克隆50 bp~10 kp片段。将载体在克隆位点进行线性化,并在插入片段PCR引物5’端引入线性化克隆载体末端序列,使得插入片段PCR产物5’和3’Z末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应的完全一致的序列 (15 bp~20 bp)。将这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化克隆载体按一定比例混合,在重组酶Exnase的催化下,仅需反应30 min即可进行转化,完成定向克隆。克隆阳性率可达95%以上。克隆载体酶切产物或PCR产物和插入片段PCR产物可以不进行DNA纯化直接用于重组克隆,极大的简化了实验步骤。
试剂盒中包含有重组反应所需缓冲液和重组酶Exnase,Exnase中添加了独特的重组增强因子,显著提高重组克隆效率,即便使用低效率感受态细胞 (107 cfu/μg)也可实现GX克隆 (100 cfu/ng Vector),而且Exnase还兼容常规酶切、PCR反应体系。
一步法(快速/无缝)克隆试剂盒可用于快速克隆、高通量克隆、无缝克隆和DNA定点突变。
产品组份:
5×CE Buffer——————100μl
Exnase——————50μl
500 bp control insert (25 ng/μl)——————5μl
pUC 19 control vector, linearized (50 ng/μl)————5μl
实验流程概览
1) 线性化克隆载体制备;
2) 插入片段扩增引物设计;
3) 插入片段PCR扩增;
4) 进行重组反应;
5) 反应产物转化、涂板;
6) 克隆鉴定。
图一 实验流程概览
注:插入片段PCR扩增时,引物5’端引入线性化克隆载体末端同源序列 (图中以蓝色和橙色标记),使得扩增产物5’和3’Z末端序列分别和线性化克隆载体两末端序列完全一致。
我公司销售的
一步法(快速/无缝)克隆试剂盒现货供应,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
温馨提示:不可用于临床ZL。