动物组织/细胞线粒体提取试剂盒北京厂家

特别提示：包括动物组织/细胞线粒体提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：动物组织/细胞线粒体提取试剂盒
英文名称：Animal tissue/cell Mitochondrion Extraction Kit
产品货号：XH009
产品规格：50T|100T

本试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织（肝或脑组织）和硬组织（肌肉）以及培养细胞的线粒体的制备。其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。

试剂盒组成：

组份	50T	100T
Lysis Buffer	50mL	100 mL
Mito-Wash Buffer	25 mL	50mL
Store Buffer	5 mL	10 mL

保存条件：4℃可保存一个月，长期请置于-20℃保存。

操作步骤：
1．样本处理
a．组织匀浆：称取100~200mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer，0℃冰浴上下研磨组织20次；
b．培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800×g 5~10min离心收集细胞。计数。每次提取需要5×10⁷个细胞，加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨30~40次；
2．将组织或细胞匀浆物转移到离心管，4℃，1000×g离心5min；
3．取上清，加入一新的离心管中，4℃，1000×g再次离心5min。
4．取上清，加入一新的离心管中，4℃，12,000×g离心10min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底；
5．在线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀，4℃，1000×g离心5min；
6．取上清，加入一新的离心管中，4℃，12,000×g离心10min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底；
7．用50～100μL Store Buffer或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事项：
1．为保证获得完整的线粒体，是全程低温操作。第二是快速。第三，在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞是制备线粒体的zuì关键环节。与组织块相比，培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁，因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
2．以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。
3．进行Western Blot和2D-胶电泳，可直接加入上样缓冲液裂解线粒体。

一般低温度心机都有离心力显示，如果没有，可以用以下公式简单的换算。
  G＝1.11×(10^-5)×R×[rpm]²
G为离心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍数来表示；[rpm]²即：转速的平方；R为半径，单位为厘米。

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