RNAi技术服务 

RNAi技术服务    

       研究表明，将与mRNA同源的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA（dsRNA）导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，从而YZ其相应基因的表达。这种转录后基因沉默机制（Post-transcriptional gene silencing, PTGS）被称为RNA干扰（RNAi）。由于RNAi具有高度的序列专一性，可以特异地使特定基因沉默，获得功能丧失或降低突变，因此RNAi可以作为一种强有力的研究工具，用于功能基因组的研究。

      我们应用国外知名公司的RNAi Designer平台，可对靶基因序列进行干扰位置效应评价和序列同源型分析，完成siRNA/miRNA多种序列的的设计，并提供从siRNA合成、RNAi载体构建到RNAi功能验证等全面的RNAi解决方案。

      1、siRNA合成

      客户提供：

        1）目的基因的Accession Number（Human、Mouse或Rat种属）以及技术要求（包括OD和nmols的精确数量、纯化类型和修饰要求等）

        2）细胞株和详细的细胞培养的操作步骤

        3）一抗（如果需要Western blot检测）

      注： 普通siRNA：均有HPLC纯化，100％除去尚未配对的单链 ；化学修饰siRNA：利用修饰以提高siRNA在血清和培养基种的稳定性；荧光标记siRNA；siRNA对照：普通阴性对照、荧光标记的阴性对照（易观察，可观察转染效率）和siRNA阳性对照（作为一个实验系统检查，确保在您的实验方法是可靠的；

      2、质粒载体shRNA的构建

      客户提供：待研究mRNA序列信息。

      3、microRNA干扰载体构建

      客户提供：

        1） 目的基因的Accession Number（Human、Mouse或Rat种属）

        2）细胞株和详细的细胞培养的操作步骤

        3）一抗抗体（如果需要Western blot检测）

      1、siRNA合成：

        1）转染效率分析 ；

        2）Knockdown结果。

      针对靶基因设计的3条siRNA可保证其中2条的Knockdown效率达到75％（在转染效率大于80％的情况下）。

      2、质粒载体shRNA的构建：

        1）阳性克隆质粒；

        2）阳性克隆甘油菌；

        3）测序报告以及实验方法报告。

      3、microRNA干扰载体构建：

        1）构建好的表达载体和相应的甘油菌；赠送阴性对照甘油菌 ；

        2）测序报告 ；

        3）转染效率分析 ；

        4）Knockdown结果。

      针对某靶基因设计的3条miRNA序列，在转染效率 > 80％的前提下，我们保证至少有1个克隆可以达到70％转录水平的沉默效率服务流程 。