特别提示:包括PCR优化试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床YL及其他非科研用途!
产品名称:PCR优化试剂盒
英文名称:PCR Optimization Kit
产品货号:JN0045
产品规格:80次
本试剂盒为您提供了8 种耐热聚合酶和相应的精心配制的缓冲液,其中缓冲液的pH值,盐离子浓度和助溶剂成分等各不相同,当扩增某些复杂的基因模板等出现问题时,应测试不同的聚合酶及反应缓冲体系。另外,本试剂盒还提供了PCR增强剂,能增加引物的特异性,提高DNA聚合酶的热稳定性,适应较宽范围的退火温度和Mg2+浓 度。可以在试剂盒提供的8种聚合酶及相应反应体系的基础上再添加PCR增强剂,以找到PCRzuì适反应体系从而达到zuì佳的PCR反应效果。
为什么选择本试剂盒?
影响PCR反应的因素很多,如聚合酶本身的性质,pH值,酶保护剂,助溶剂等,只有在这些因素都是zuì适的情况下才能获得较好的扩增产物。
试剂盒组成:
组份 | 规格 |
Taq DNA 聚合酶(5U/μl) | 20μl |
5×Taq Buffer with Mg2+ | 1ml |
UltraTaq DNA 聚合酶 (5U/μl) | 20μl |
5×UltraTaq Buffer with Mg2+ | 1ml |
Taq Plus DNA 聚合酶 (5U/μl) | 20μl |
5×Taq Plus Buffer with Mg2+ | 1ml |
UltraTaq Plus酶 (5U/μl) | 20μl |
5×UltraTaq Plus Buffer with Mg2+ | 1ml |
Pfu DNA 聚合酶 (5U/μl) | 20μl |
10×Pfu Buffer with Mg2+ | 1ml |
Fast Pfu DNA 聚合酶 (5U/μl) | 20μl |
5×Fast Pfu Buffer with Mg2+ | 1ml |
2×Hot Start Taq PCR MasterMix | 500μl |
2×Hot Start Taq Plus PCR MasterMix | 500μl |
PCR 增强剂I | 200μl |
PCR 增强剂II | 200μl |
各种PCR聚合酶的反应速度:
PCR聚合酶 | 反应速度 |
Taq DNA 聚合酶 | 1kb/60秒 |
UltraTaq DNA 聚合酶 | 4kb/60秒 |
Taq Plus DNA 聚合酶 | 1kb/60秒 |
UltraTaq Plus酶 | 4kb/60秒 |
Pfu DNA 聚合酶 | 0.5kb/60秒 |
Fast Pfu DNA 聚合酶 | 2kb/60秒 |
Hot Start Taq DNA 聚合酶 | 1kb/60秒 |
Hot Start Taq Plus DNA 聚合酶 | 1kb/60秒 |
常用反应体系(50ul):
组分 | 体积 |
5×Buffer | 10μl |
上游引物 | 0.05uM(终浓度) |
下游引物 | 0.05uM(终浓度) |
dNTP(各10mM) | 1.0μl |
模板 | 1-50ng(质粒) |
10ng-1ug(基因组) |
PCR聚合酶 | 0.25μl(1.25U) |
ddH2O | 至50μl |
常用PCR循环:
当扩增片段<3K: |
94℃ | 1分钟30秒 |
30次循环 | 94℃,20秒 57℃,20秒 72℃ 根据产物长度调整,各种聚合酶的扩增速度见上面表格 |
72℃ | 5分钟 |
4℃ | 保温 |
当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp): |
94℃ | 1分钟30秒 |
30次循环 | 94℃,5秒 68℃根据产物长度调整,各种聚合酶的扩增速度见上面表格 |
72℃ | 5分钟 |
4℃ | 保温 |
* Hot start Taq DNA聚合酶和Hot start Taq Plus DNA聚合酶预变性条件为94℃,10分钟 |
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温馨提示:不可用于临床ZL。