YO-PRO-1 Iodide and PI Membrane Permeability Apoptosis Detection Kit

• 流式细胞仪检测

下面使用方法为我们使用Jurkat细胞对实验条件进行的优化，用喜树碱处理以诱导细胞凋亡，对于其他类型的细胞，实验条件可能需要进行一些修改，已达到的实验结果。
1. 根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处理的细胞样品，作为阴性对照。此外，设定一组样品做单染， 用于调节补偿。
2. 收集细胞。悬浮细胞：300 g，4℃离心 5 min 收集细胞； 贴壁细胞：用胰酶消化后 300 g，4℃离心 5 min收集细胞，胰酶消化时间不宜过长，以防引起假阳性。
3. 用冷的PBS将收集到的细胞清洗两遍，用1mL 的冷的PBS悬浮细胞，使细胞密度控制在约1 × 10⁶cells/mL。
4. 向上述1mL细胞悬液中加入1µL YO-PRO-1 Iodide和1µLPI，轻轻吹打混匀。
注：我们推荐准备两管额外的流式管，每管中只加入一种单染染料（YO-PRO-1 Iodide 或PI），用于单染的补偿调节。
5. 在冰上孵育细胞20~30min。
6. 孵育完成后，尽量在1~2h内用流式细胞仪检测。YO-PRO-1 Iodide 可以由 488 nm 激光激发，检测荧光发射光谱约在530±30 nm 处（FITC通道），PI 通道发射光谱约在 617 nm 处（PI或PE通道）。