Injectable native Coelenterazine 注射用天然腔肠素

腔肠素（Coelenterazine）是在水生生物中发现的一种发光基团（luminophore），是许多荧光素酶的作用底物，包括海肾荧光素酶（Renillareniformis luciferase, Rluc），分泌型膜锚定荧光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和薮枝虫荧光素酶（Obelialuciferase），和发光蛋白包括水母发光蛋白（Aequorin）的构成之一。其作用原理是以腔肠素为底物的荧光素酶，在含分子氧的条件下，氧化腔肠素产生高能量的中间产物，在此过程中发射蓝色光，光波长在450~480nm【见图1】。而甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶（FLuc）系统不同，其在含分子氧的条件下，还需要ATP和Mg2+的存在才能同时发光，光波长在550-570nm。正由于生物发光信号和底物的差异，RLuc常常与FLuc联合用于多重转录报告基因研究，或用作Fluc系统内萤火虫荧光素酶转染的内参。腔肠素应用甚是广泛，包括：1）活细胞或组织的钙离子检测；2）细胞或组织的超氧化物和过氧亚硝基阴离子（活性氧，ROS）化学发光检测；3）基因报告基因检测；4）动物活体检测；5）ELISA和生物发光共振能量转移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）药物高通量筛选（HTS）；图1. 海肾荧光素酶（Rluc）催腔肠素发光的反应流程天然腔肠素（Coelenterazine Native）是自然界中存在Z丰富的一种腔肠素，也是目前应用Z普遍的一种标准底物。不仅是天然水母发光蛋白复合物的发光基团，也是海肾荧光素酶（Rluc）和分泌型膜锚定荧光素酶（Gluc）等的作用底物。还可用于生物共振能量转移BRET，细胞或组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子水平（ROS）的化学发光检测。本品为体内成像研究的注射用天然腔肠素（Injectablenative Coelenterazine），不仅含有超纯的天然腔肠素（＞99%），还提供特别设计的Inject-Diluent溶剂，能够程度的溶解腔肠素，从而Z小化体内注射体积。另外，与传统乙醇溶解的腔肠素相比，用Inject-Diluent溶解的腔肠素能得到更好的荧光信号。 1） 本品特别开发适用于体内实验。若仅做体外实验，可使用我司提供的天然腔肠素（Coelenterazine Native）（#MX4606-1MG）或腔肠素h（Coelenterazineh）（#MX4608-1MG）。3） 操作步骤2．  将150μl Inject-Diluent打入NativeCoelenterazine瓶内，使用针头和注射器上下吸打或低速涡旋，直至看到完全透明溶液，此时得到腔肠素溶液浓度为3.33mg/ml。如果溶液没有完全透明，用水浴锅或加热板在60-80℃加热几分钟，检查完全透明。3．  按下表1，用胰岛素注射器吸取15-75μl充分溶解的腔肠素溶液（3.33mg/ml），通过尾静脉注射到动物体内。检查，排气，冲洗针头。使用胰岛素注射器的优势在于很低的液体滞留体积（＜2μl）。缓慢注射。