Wien 133人非何杰金氏淋巴瘤细胞系 专业传代培养技术指导

Wien 133人非何杰金氏淋巴瘤细胞系 专业传代培养技术指导
Chapman Stone琼脂培养基，英文名：Chapman Stone Agar Medium，用途：用于金黄色葡萄球菌的分离培养
KTA-7细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
WEHI-3[WEHI3]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HEEpiC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
8505C细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞；细胞传代方法：1：6传代
抗生素培养基B(PH7.3)，英文名：Medium B（PH7.3），用途：用于抗生素检测，每100ml需添加1支吐温80
碎肉葡萄糖肉汤基础，英文名：Chopped Meat Glucose（CMG），用途：用于厌氧菌特别是专性厌氧菌的培养,含VK ,需添加庖肉牛肉粒
J774A.1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：单核细胞/巨噬细胞样；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分
铜培养基，英文名：Bluestone Medium，用途：用于啤酒野生酵母的检验
CAL-85-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SW756细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人前胸腺素α(PTMα)ELISA试剂盒，英文名：Human PTMα ELISA Kit，规格：48T/96T
人着丝粒蛋白B(CENPB)ELISA试剂盒，英文名：Human CENPB ELISA Kit，规格：48T/96T
NUGC-3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：6传代
K1735细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
马铃薯葡萄糖琼脂，英文名：Potato Dextrose Agar，用途：药典/欧洲药典，用于霉菌和酵母菌计数
SCCRAM肉汤，英文名：SCCRAM Broth，用途：用于沙门氏菌前增菌
马铃薯琼脂，英文名：Potato Agar，用途：不含葡萄糖，用于霉菌的分离培养
小鼠白介素20(IL-20)ELISA试剂盒，英文名：Mouse IL-20 ELISA Kit，规格：48T/96T
人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子抗体(GM-CSF Ab)ELISA试剂盒，英文名：Human GM-CSF Ab ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
大鼠内质网核信号1(ERN1)ELISA试剂盒，英文名：ERN1 ELISA Kit，规格：48T/96T
脑-心浸萃琼脂培养基，英文名：Brain-Heart Extraction Agar Medium，用途：用于粪链球菌验证,也可用于苛养菌的培养
无机盐淀粉琼脂，英文名：ISP Medium4(Inorganic Salts-Starch Agar)，用途：用于链霉菌属的培养鉴定
细胞复苏相关注意事项：1.取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。2.冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜(DMSO )对细胞不是完全，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在1-2min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜(DMSO)Z好选择进口产品。3.离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。4.离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO)，DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无异常。5.细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml-15ml培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。6.复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。7.加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是1%。所以如果你的冻存液的浓度是10%DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
42℃生长试验用培养基，英文名：42℃ Growth Medium，用途：用于副溶血性弧菌42℃生长试验
细胞背景资料：详见相关文献介绍
YPDA琼脂，英文名：Yeast Peptone Dextrose Adenine Agar，用途：用于分子生物学实验中酵母菌的培养
CMT93细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MKN28细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H2066[H2066]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Neuro-2a细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：4传代；2-3天换液1次
碎肉肉汤基础，英文名：Chopped Meat Broths（CM），用途：用于厌氧菌特别是专性厌氧菌的培养,含VK ,需添加庖肉牛肉粒
厌氧菌琼脂，英文名：Anaerobic Agar，用途：用于厌氧微生物的培养
肌醇测定培养基，英文名：Inositol Assay Broth，用途：用于肌醇的测定
HConEpic细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NSC-34细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
C518细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
TYCSB培养基基础，英文名：Tryptone Yeast Cystine Sucrose Bacitracin Medium，用途：用于变异链球菌的分离, 每100ml添加1支杆菌肽
双抗巧克力琼脂基础，英文名：Bi-Anti Chocolate Agar Base，用途：用于嗜血杆菌和奈瑟菌的培养,每100ml添加1支双抗巧克力琼脂添加剂和5%无菌脱纤维绵羊全血
马铃薯葡萄糖琼脂，英文名：Potato Dextrose Agar，用途：药典/欧洲药典，用于霉菌和酵母菌计数
细胞形态特性：详见细胞说明书
细胞培养中支原体污染的经验分享：支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.3-0.5um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。它不同于细胞，也不同于病毒。支原体用普通染色法不易着色，用姬姆萨染色很浅，革兰染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长，营养要求比细菌高。细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染是个世界性问题。在细胞培养中支原体感染发生率达到63%，支原体感染发生后能改变细胞的DNA,RNA及蛋白表达，又不能通过可视法对其进行检测，而且它对细胞的生长率影响较小，不易引起注意。国内外研究表明，95%以上是以下四种支原体：口腔支原体(M.orale)、精酸支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)和莱氏无胆甾原体(A.laidlawii)，为牛源性。以上是Z常见的污染细胞培养的支原体菌群，但能够污染细胞的支原体种类是很多的，国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(一些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。组织细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：控制环境污染;严格实验操作；细胞培养基和器材要保证无菌；在细胞培养基中加入适量的抗生素。支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。支原体Z突出的结构特征是没有细胞壁，一般来讲，对作用于细胞壁生物合成的抗生素，如万古霉素等完全不敏感；对多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺药物普遍耐药。对支原体Z有YZ活性及常用于支原体感染ZL的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些喹诺酮;其他类抗生素如基糖苷类、霉素对支原体有较小YZ作用，所以常不用来作为支原体感染的化学ZL剂。
小鼠基质金属蛋白酶3(MMP3)ELISA试剂盒，英文名：Mouse MMP3 ELISA Kit，规格：48T/96T
无菌试验用真菌培养基，英文名：Sterility Test Fungus Medium，用途：用于真菌杀灭试验
胰蛋白胨葡萄糖酵母浸膏肉汤(TPGYT基础)，英文名：TPGY Broth（TPGYT Base），用途：用于肉毒梭菌增菌培养,添加1:250胰蛋白酶配制成TPGYT
小鼠细胞色素P450家族成员3A4(CYP3A4)ELISA试剂盒，英文名：Mouse CYP3A4 ELISA Kit，规格：48T/96T
人干扰素α13(IFNα13)ELISA试剂盒，英文名：Human IFNα13 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠干扰素诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA试剂盒，英文名：Mouse IP-10/CXCL10 ELISA Kit，规格：48T/96T
培养细胞真的不难，Z关键几点：1)所有的东西使用Z好的，如果你用的血清、培养皿、培养基、胰酶什么的都是进口的，真的很难相信你会把细胞养坏；2)动作要快，胰酶消化，换液什么，细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外，要掌握好胰酶消化时间，所谓的细胞状态差，很多时候是传代的原因；3)有时间的话，需要细胞计数，传相应数目的细胞到培养皿中，可以大致清楚细胞的生长曲线，不会临时要处理，手足无措；4)要做什么心里要非常清楚，合理安排时间，传代细胞的实验穿插进行，可以节省很多时间，也不会耽误别人的实验；5)个人的实验器具自己收一套，不要和别人混用，Z近换了什么新的东西稍微记一下，试剂一旦怀疑污染，马上丢；6)传代细胞不能进去太多人，避免相互干扰。每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了，培养细胞时有哪些经验教训可以分享呢?1)严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干；2)不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套；3)有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测；4)水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换(灭菌水加进去)；5)晚上离开的时候Z好给传代细胞照紫外，超净台是用完就开；6)Z好的是同一时间就你一个人在用传代细胞在养细胞。
酵母基酸缺陷型合成液体培养基(组酸/亮酸/色酸/腺嘌呤缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Fluid Medium，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
HHUA细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
P3X63Ag8.653细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HOMEC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SLK细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。