COS-7SV40转化的非洲绿猴肾细胞系 消化操作需要注意什么

COS-7SV40转化的非洲绿猴肾细胞系 消化操作需要注意什么
M-肉汤，英文名：M-Broth，用途：用于干燥食品和种子中沙门氏菌的增菌和培养
水合乳糖肉汤，英文名：Lactose Monohydrate Broth，用途：用于大肠菌群测定
毛藓菌琼脂4号，英文名：Trichophyton Agar #4，用途：用于毛藓菌属的鉴定
小鼠Jagged小鼠1蛋白(JAG1)ELISA试剂盒，英文名：Mouse JAG1 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠凝血因子ⅩⅢB(FⅩⅢB)ELISA试剂盒，英文名：Mouse FⅩⅢB ELISA Kit，规格：48T/96T
麦康凯肌醇阿东醇羧苄青霉素琼脂(MIAC)基础，英文名：MIAC Agar Base，用途：用于克雷伯氏菌选择性分离,每100ml添加1支羧苄青霉素
细胞背景资料：此细胞株源自CV-1细胞株，经转染起始点缺失的SV40病毒突变体得到；编码表达野生型T抗原，所以该细胞适合作为需要SV40T抗原表达的载体的转染宿主。该细胞表达T抗原，允许SV40病毒的溶解性生长，支持40℃时温度敏感性A209病毒的复制，支持起始区域缺陷的SV40突变体的复制。因含有SV40病毒的DNA序列，该细胞需要在2级生物安全柜中操作。
麦康凯琼脂，英文名：MacConkey Agar，用途：用于肠道菌选择性分离
小鼠Podocin蛋白(Podocin)ELISA试剂盒，英文名：Mouse Podocin ELISA Kit，规格：48T/96T
人白介素1θ(IL1θ)ELISA试剂盒，英文名：Human IL1θ ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞培养中支原体污染的经验分享：支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.3-0.5um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。它不同于细胞，也不同于病毒。支原体用普通染色法不易着色，用姬姆萨染色很浅，革兰染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长，营养要求比细菌高。细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染是个世界性问题。在细胞培养中支原体感染发生率达到63%，支原体感染发生后能改变细胞的DNA,RNA及蛋白表达，又不能通过可视法对其进行检测，而且它对细胞的生长率影响较小，不易引起注意。国内外研究表明，95%以上是以下四种支原体：口腔支原体(M.orale)、精酸支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)和莱氏无胆甾原体(A.laidlawii)，为牛源性。以上是Z常见的污染细胞培养的支原体菌群，但能够污染细胞的支原体种类是很多的，国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(一些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。组织细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：控制环境污染;严格实验操作；细胞培养基和器材要保证无菌；在细胞培养基中加入适量的抗生素。支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。支原体Z突出的结构特征是没有细胞壁，一般来讲，对作用于细胞壁生物合成的抗生素，如万古霉素等完全不敏感；对多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺药物普遍耐药。对支原体Z有YZ活性及常用于支原体感染ZL的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些喹诺酮;其他类抗生素如基糖苷类、霉素对支原体有较小YZ作用，所以常不用来作为支原体感染的化学ZL剂。
细胞形态特性：成纤维细胞样
NAC液体培养基，英文名：Nalidixic Acid Cetrimide Broth，用途：——用于微生态活菌制品中铜绿假单胞菌选择性增菌
化钠营养琼脂，英文名：NaCl Nutrient Agar，用途：用于副溶血性弧菌的纯化
SLB培养基，英文名：Saline Lactose Broth Medium，用途：用于CJ过滤器的细菌截留验证
K氏培养基基础，英文名：K’s Medium Base，用途：用于饮料中耐热耐酸菌的检测,需使用苹果酸调节pH
强化梭菌鉴别琼脂(DRCA)，英文名：Differentia Reinforced Clostridial Agar，用途：用于食品和其它物质中梭菌的计数和培养
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
轻唾液体培养基(MSB)基础，英文名：Mitis Salivarius Broth Base，用途：用于轻唾链球菌的选择性增菌,每200ml添加1支亚碲酸钾溶液
SK-HEP-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：3传代，2-3天换液一次
H3255细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HEC-1B细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HL60细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
豆芽汁蔗糖琼脂培养基，英文名：Soybean sprout Extract Sucrose Agar Medium，用途：用于真菌尤其是霉菌的培养
TYC琼脂培养基，英文名：Tryptone Yeast Cystine Agar Medium，用途：用于血链球菌的分离,可添加杆菌肽0.2U/ml以增加选择性
厌氧菌肉汤MIC，英文名：Anaerobe Broth MIC，用途：用于肉汤微量稀释法测定厌氧菌敏感性养和厌氧菌培养
细胞传代方法：1：2传代
DF-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
JVM-3细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MIN-6细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
IEC-6[IEC6]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
COS-7细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞样；细胞传代方法：1：2传代
细胞复苏相关注意事项：1.取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。2.冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜(DMSO )对细胞不是完全，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在1-2min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜(DMSO)Z好选择进口产品。3.离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。4.离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO)，DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无异常。5.细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml-15ml培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。6.复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。7.加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是1%。所以如果你的冻存液的浓度是10%DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
R2A琼脂，英文名：R2A Agar，用途：用于纯化水等制YY水中需氧菌总数测定
M17肉汤，英文名：M17 Broth，用途：用于牛奶和乳制品中乳酸菌的检测，每100ml添加1支10%乳糖溶液
人DEK癌基因(DEK)ELISA试剂盒，英文名：Human DEK ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠促有丝分裂因子(MF/MPF)ELISA试剂盒，英文名：Mouse MF/MPF ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
APM培养基，英文名：Aeromonas Pyrazinamidase activity Medium，用途：用于吡嗪酰胺酶活性实验,溶解于0.2M Tris-马来酸溶液
Jurkat,CloneE6-1细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞样；细胞传代方法：1：2传代
培养细胞真的不难，Z关键几点：1)所有的东西使用Z好的，如果你用的血清、培养皿、培养基、胰酶什么的都是进口的，真的很难相信你会把细胞养坏；2)动作要快，胰酶消化，换液什么，细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外，要掌握好胰酶消化时间，所谓的细胞状态差，很多时候是传代的原因；3)有时间的话，需要细胞计数，传相应数目的细胞到培养皿中，可以大致清楚细胞的生长曲线，不会临时要处理，手足无措；4)要做什么心里要非常清楚，合理安排时间，传代细胞的实验穿插进行，可以节省很多时间，也不会耽误别人的实验；5)个人的实验器具自己收一套，不要和别人混用，Z近换了什么新的东西稍微记一下，试剂一旦怀疑污染，马上丢；6)传代细胞不能进去太多人，避免相互干扰。每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了，培养细胞时有哪些经验教训可以分享呢?1)严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干；2)不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套；3)有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测；4)水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换(灭菌水加进去)；5)晚上离开的时候Z好给传代细胞照紫外，超净台是用完就开；6)Z好的是同一时间就你一个人在用传代细胞在养细胞。
MT-4细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞样；圆形；细胞传代方法：1：2传代
H8细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SK-MEL-3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞；细胞传代方法：1：3-1：5传代，2-3天换液1次。
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
自诱导TB肉汤培养基，英文名：Autoinduction Terrific Broth Medium，用途：用于重组蛋白的表达，需添加甘油
轻唾琼脂培养基(MSA)基础，英文名：Mitis Salivarius Agar Base，用途：用于轻唾链球菌的分离培养,每200ml添加1支亚碲酸钾溶液
改良Frey氏培养基基础，英文名：Modified Mycoplasma Broth Medium Base（Frey），用途：每 90ml 培养基中添加 1 支 改良Frey氏培养基基础添加剂 和 10ml 马血清
细胞生长特性：贴壁生长
AMC-HN-8细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H1417[H1417]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人胱天蛋白酶3(Caspase-3/CPP32)ELISA试剂盒，英文名：Human Caspase-3/CPP32 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠抑瘤素M(OSM)ELISA试剂盒，英文名：Mouse OSM ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠再生胰岛衍生蛋白1β(REG1β)ELISA试剂盒，英文名：Mouse REG1β ELISA Kit，规格：48T/96T
人拓扑异构酶Ⅰ(TOP1)ELISA试剂盒，英文名：Human TOP1 ELISA Kit，规格：48T/96T