COS-1SV40转化的非洲绿猴肾细胞系 消化操作需要注意什么

COS-1SV40转化的非洲绿猴肾细胞系 消化操作需要注意什么
肝浸液肉汤，英文名：Liver Infusion Broth，用途：用于布鲁氏菌及其它苛养菌的培养
MEE肉汤，英文名：MEE Broth，用途：用于肠道菌选择性增菌
2216E液体培养基，英文名：Zobell Marine Broth 2216，用途：用于海生细菌的培养
大鼠钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)ELISA试剂盒，英文名：KLH ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠皮肤蛋白(DPT)ELISA试剂盒，英文名：DPT ELISA Kit，规格：48T/96T
0.1%蛋白胨水培养基，英文名：0.1% Peptone Water Medium，用途：用于样品制备
细胞背景资料：该细胞源自CV-1细胞株，经转染编码野生型T抗原、起始点缺陷突变的SV40得到；细胞中整合有SV40基因组完整早期区段的单个拷贝。该细胞表达T抗原，适用于需要SV40T抗原表达的载体的转染；保留SV40溶细胞性生长的特性；支持40℃时温度敏感性A209病毒的复制；支持早期区段缺失的SV40纯体的复制。因含有SV40的DNA序列，该细胞需要在2级生物安全柜中操作。
肠球菌肉汤，英文名：Enterococcus Broth，用途：用于肠球菌选择性菌
小鼠细胞色素C氧化酶亚基Ⅲ(COX3)ELISA试剂盒，英文名：Mouse COX3 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPAR-γ)ELISA试剂盒，英文名：PPAR-γ ELISA Kit，规格：48T/96T
为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在-70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键，在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内，水晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。冻存细胞的复苏：冻存细胞较脆弱，要轻柔操作。冻存细胞要快速融化，并直接加入完全生长培养基中。若细胞对冻存剂(DMSO或甘油)敏感，离心去除冻存培养基，然后加入完全生长培养基中。直接铺板方法：取出贮存细胞，37℃水浴中快速融化；直接用完全生长培养基铺板细胞。1ml冻存细胞使用10~20ml完全生长培养基。进行活细胞计数，细胞接种应该至少在3×10(5)活细胞/ml；培养细胞12到24小时，更换新鲜的完全生长培养基，去除冻存剂。离心方法：取出贮存细胞，37℃水浴中快速融化；把1到2ml冻存细胞加入到大约25ml完全生长培养基，轻轻混匀；以大约80x离心2到3分钟；弃去上清。在完全生长培养基轻轻再次悬浮细胞，并且进行活细胞计数。细胞铺板，细胞接种应该至少为3×10(5)活细胞/ml。细胞的分化：一个成年人全身细胞总数约1012个，可以区分为200多种不同类型的细胞：形态结构，代谢，行为，功能等各不相同。追根溯源，这么多种细胞均来自一个受精卵细胞。所以，通常把发育过程中，细胞后代在形态、结构和功能上发生差异的过程称为细胞分化。细胞分化发生在胚胎阶段，也发生在胎儿出生以后，乃至成人阶段。例如，人体血细胞的产生和分化，这个过程在人的一生中一直持续着。由旺盛生长不断分裂的细胞，转入分化，通常从细胞周期中G1期开始时一个确定的点G0点“逃逸”出细胞周期。旺盛生长分裂的细胞和各种分化了的细胞，它们的基因表达和代谢活动各不相同。
细胞形态特性：成纤维细胞样
N6培养基(不含蔗糖和琼脂)，英文名：N6 Medium without Agar and Sucrose，用途：适合于愈伤组织和悬浮细胞培养
B12肉汤培养基，英文名：B12 Assay Medium，用途：用于维生素B12检测
改良巴尔斯氏培养基基础(含2.5%NaCl)，英文名：Baar,s Medium for Sulfate Reducers, Modified with，用途：用于脱肠球菌等盐还原细菌的培养，每100ml添加1支35%乳酸钠溶液
PS琼脂，英文名：Peptococcus Selective Agar，用途：用于消化球菌的分离培养
乳酸菌霉素琼脂2，英文名：Lactobacillus Chloramphenicol Agar 2，用途：——用于干酪乳杆菌和乳酸片球菌的培养
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
梭杆菌选择性琼脂基础，英文名：Fusobacterium Selective Agar (FSA) Base，用途：用于梭杆菌的选择性分离和培养,需添加羊血及抗生素
HAN细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CT-26.WT细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
OCUM-1细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞；细胞传代方法：1：2传代
preB-697细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
mCPC琼脂基础(CC琼脂基础)，英文名：Modified Cellobiose-Polymyxin B-Colistin Agar Base，用途：用于创伤弧菌的分离,每90ml添加2支25%纤维二糖溶液、1支多粘菌素E和1支多粘菌素B溶液
自诱导TB肉汤培养基，英文名：Autoinduction Terrific Broth Medium，用途：用于重组蛋白的表达，需添加甘油
3%化钠碱性蛋白胨水，英文名：3%Nacl Alkaline Peptone Water，用途：用于副溶血性弧菌选择性增菌
细胞传代方法：1：2传代
HX147细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NHLF细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NG108-15 [108CC15]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞样　；细胞传代方法：1：6-1：10传代，每周换液2-3次
HT1080细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2传代
Neuro-2a[N2a]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
贴壁细胞消化传代时通常采用两种方法：一、加入胰酶等细胞脱落后，再加培养基中止胰酶作用，离心传代；二、加入胰酶后，镜下观察待细胞始脱落时，弃胰酶，加培养液分瓶。但前者太麻烦，而后者有可能对细胞施加胰酶选择，因为总是贴壁不牢的细胞先脱落，对肿瘤细胞来说，这部分细胞有可能是恶性程度较高的细胞亚群。一种简单的消化传代方法。加入PBS洗去血清或加入胰酶先中和血清的作用(30s)，弃之，再加入适量胰酶作用10s-40s(根据细胞消化的难易程度)，弃之，这样依赖残余的胰酶就可将细胞消化单细胞。对于较难消化的细胞，可以用2%利多卡因消化5-8分钟，然后再弃去，加培养基吹打也可以，对细胞的影响不大。不用PBS也不用Hanks洗，只要把旧培养液吸的干净一点，直接加酶消化应该不会有什么问题。弃培养液后，用0.04%的EDTA冲洗一次，再用1/4v的0.04%的EDTA室温孵育5min，弃取大部分EDTA，加入与剩余EDTA等量的胰酶(预热)总体积1/10v。消化到有细胞脱落。不过有人说EDTA对细胞不好，有证据吗？培养的BASMC：倒掉旧培养液加入少量胰酶冲一下，倒掉再加入0.125-0.25%胰酶约6-10滴或1ml(25ml bottle)消化再加入适量新培养基中和，并分瓶这种方法简单、省事；效果很好并且不损失细胞！
碳琼脂，英文名：Charcoal Agar，用途：用于苛氧菌尤其是百日咳博鲍特氏菌培养
BIGGY琼脂，英文名：Bismuth Sulfite Glucose Glycine Yeast Agar，用途：用于念珠菌的分离和计数
人抗环胍酸肽抗体(CCP)ELISA试剂盒，英文名：Human CCP ELISA Kit，规格：48T/96T
人CCAAT增强子结合蛋白γ(CEBPγ)ELISA试剂盒，英文名：Human CEBPγ ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
沙氏脑心浸液琼脂基础，英文名：Sabouraud Brain Heart Infusion Agar Base，用途：用于真菌的选择性分离,每100ml培养基中添加1支霉素溶液
OAW42细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)：1)吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间，通常控制在1-2min)；2)镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶，加6-8ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散；3)取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养；4)注意培养基PH值变化情况，定期换液(每周2-3次)，待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存；特别注意：(如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养)1)收到细胞后请尽快更换为含15%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清，(原瓶培养基的继续使用时间Z长不宜超过72小时)；2)贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养；3)如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室。
VERO C1008细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
PAa细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SHEP1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
YM肉汤(酵母霉菌肉汤)，英文名：Yeast Mold Broth，用途：用于霉菌、酵母菌和其它耐酸菌的培养
卵黄琼脂培养基基础，英文名：Egg Yolk Agar Base，用途：用于梭菌的分离培养,每100ml添加2支50%卵黄盐水悬液
马铃薯琼脂，英文名：Potato Agar，用途：不含葡萄糖，用于霉菌的分离培养
细胞生长特性：贴壁生长
Miapaca2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
G401细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人血小板因子4变种1(PF4V1)ELISA试剂盒，英文名：Human PF4V1 ELISA Kit，规格：48T/96T
人核仁蛋白1(NOL1)ELISA试剂盒，英文名：Human NOL1 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠双糖链蛋白聚糖(BGN)ELISA试剂盒，英文名：Mouse BGN ELISA Kit，规格：48T/96T
人高尔基蛋白73(GP73)ELISA试剂盒，英文名：Human GP73 ELISA Kit，规格：48T/96T