H-EMC-SS人软骨肉瘤细胞系 专注复苏 常年直销价

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细胞传代培养(消化法)标准操作规程【原理】细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。【材料和试剂】1)无菌生理缓冲液(PBS)；2)胰酶-EDTA溶液(0.05%胰酶-0.53mM EDTA-4Na): 以10ml分装于15 ml无菌离心管中，保存于–20℃，使用前放在37℃水槽回温；3)新鲜培养基；4)无菌吸管/离心管/培养瓶【传代前准备操作】1)预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热；2)用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手；3)正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染；4)点燃酒精灯：注意火焰不能太小；5)准备好将要使用的消毒后的空培养瓶；6)取出预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内；7)从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞；8)打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。
人单纯疱疹病毒抗原2(HSV-Ag2)ELISA试剂盒，英文名：Human HSV-Ag2 ELISA Kit，规格：48T/96T
LS180(CL-187)[LS180]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
BCPAP/B-CPAP细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CATH.a细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HNE2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
如何进行细胞复苏：1)从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化；2)从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；3)离心，1000rpm，5min；4)弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养；5)次日更换一次培养液，继续培养。【温馨提醒】1)从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但Z好为对数生长期细胞。在冻存前一天Z好换一次培养液；2)将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作(戴棉手套)，以免冻伤；3)冻存和复苏Z好用新配制的培养液。细胞复苏的时候，有些初次实验员将冻存管从液氮中取出后，放在室温下，经常发生冻存管爆炸，该怎么避免出现这种情况吗？其中在拧紧冻存管的时候是否有哪些细节要注意的？一般常用的方法是取出冻存管后在超净工作台中用酒精棉球擦试管口，再稍拧松盖子，再放37度水浴锅中摇溶，在将细胞转移到装有37度预热过的培养基的试管中，迅速离心，再用培养基洗一遍。
PMVEC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CEC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
TE-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
RPMI 6666细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长 ；细胞形态特性：淋巴母细胞样；细胞传代方法：3-4天换液1次。
WK256细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Panc03.27细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
大鼠性别决定区Y框蛋白2(SOX2)ELISA试剂盒，英文名：SOX2 ELISA Kit，规格：48T/96T
人离子通道辅助蛋白1(CLCA1)ELISA试剂盒，英文名：Human CLCA1 ELISA Kit，规格：48T/96T
HTB-9细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞生长特性：贴壁生长
NCI-H1155[H1155]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
DU145[DU145,DU-145]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HT-29细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
人胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)ELISA试剂盒，英文名：Human IGFBP3 ELISA Kit，规格：48T/96T
人补体成分3a(C3a)ELISA试剂盒，英文名：Human C3a ELISA Kit，规格：48T/96T
人脑型脂肪酸结合蛋白(FABP7)ELISA试剂盒，英文名：Human FABP7 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
SUP-B15细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HT1376细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
3T3-Swissalbino细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Tca8113细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
95C细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞形态特性：详见细胞说明书
OCM-1A细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞消化过程总结：其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可，吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足够消化细胞（绝大部分1min不到）。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后37度消化。2，什么算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了（虽然没有呈现很广的离散分布）。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性，无论死活的细胞都是如此，你可以尝试，准备的单个细胞悬液，贴壁后观察细胞，仍然是几个几个细胞聚集在一起。一些悬浮培养细胞也是如此，容易聚集，不要去尝试过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液（不要笑，这个是初养悬浮细胞的人常犯的错误，以为悬浮培养就是一个一个分开）。细胞只要能从基质上脱离下来，这个时候即使是成片的（比如Calu-3细胞），吹打不超过20次后（一般10次即可），成小规模聚集（10个细胞左右），是正常的，不要试图再去延长消化时间，或者像有的同学那样吹打1h，等待单细胞悬液出现。比较难消化的细胞（润洗方法5min还不能消化），比如HCT15, LS411和KM12，这样的细胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100mm dish，一次Z多加入500ul，就足够了，一般我加300ul。即使这样难消化的细胞，一般不超过5min，即可见细胞成片移动，就应该停止消化。一些正常细胞也会有难消化的时候，比如tsDC细胞，但也只要用少量胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙状移动。
HConEpic细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HDF-n细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CHO-dhFr-细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
hUC-MSC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
大鼠α半乳糖苷酶(αGAL)ELISA试剂盒，英文名：αGAL ELISA Kit，规格：48T/96T
人几丁质酶1(CHIT1)ELISA试剂盒，英文名：Human CHIT1 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞背景资料：详见相关文献介绍
细胞传代方法：1：4-1：8传代；每周换液3次。
小鼠活化凝血因子X(FXa)ELISA试剂盒，英文名：Mouse FXa ELISA Kit，规格：48T/96T
人胃泌素细胞抗体(GCA)ELISA试剂盒，英文名：Human GCA ELISA Kit，规格：48T/96T
ES-2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：3传代，2-3天传一次
NCI-H2228细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
BHK-21细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞样；细胞传代方法：1：2传代，每周换液1-2次。
BMSC/hBMSCs细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Caco-2[Caco2]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
ES-2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：3传代，2-3天传一次