DMS-79人小细胞肺癌细胞系 复苏技术经验丰富

DMS-79人小细胞肺癌细胞系 复苏技术经验丰富
细胞背景资料：详见相关文献介绍
T47D细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
SU-DHL-1细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H716 [H716]细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
UM-UC-3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2传代
常见细胞培养中一些问题总结：1)培养基中血清的比例多少合适？血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的含量多少会对细胞的生长会产生极大的影响。血清的含量一般为5%-15%，不要低于5%或高过20%，因为含量过低会导致细胞营养不足，过高则会破坏渗透压平衡。一般建议血清含量为10%，可以适量加减；2)何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。还可以参照指示剂的颜色变化进行更换；3)购买的复苏细胞，为何会有脱落？因为运输的过程中不可避免的会有震荡，收到后可以离心收集；4)购买的细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可；5)购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80°C太久；6)收到的冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。
KYSE450细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H2141[H2141]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
PG-LH7细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SNU16细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
PAMC82细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Colon26细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
5637细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：4-1：8传代；每周换液2-3次。
SRS-82细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Miapaca2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
PG-BE1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SK-N-BE(2)-C细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
786-O[786-0]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代方法：1：2-1：4传代，每周2-3次
普通琼脂，英文名：Routine Agar，用途：含0.1%二钾,用于致病性嗜水气单胞菌的纯化
碳酸钠琼脂基础，英文名：Sodium Hydrogen- Carbonate Agar Base，用途：用于炭疽杆菌的毒力测定,每100ml添加3～5ml无菌马血清
蔗糖胰蛋白胨肉汤，英文名：Sucrose Tryptone Broth，用途：用于致病性嗜水气单胞菌的斑点酶联免疫试验
抗生素检测用培养基Ⅱ，英文名：Antibiotic Examination Medium Ⅱ，用途：用于乳及乳制品中舒巴坦敏感β-内酰胺酶类药物检验
牛心汤琼脂，英文名：Cattle Heart Broth Agar，用途：用于绵羊血琼脂平板制备
KM2猪肺炎支原体肉汤培养基，英文名：KM2 Mycoplasma Hyopneumoniae Broth Medium，用途：江苏二号，需添加马血清、青霉素
NCI-H1792细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NRK-52E细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2传代
SK-MES-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
GT38细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
Fox-NY细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
U937细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
YTMLC-90细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MES-SA细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞样　；细胞传代方法：1：6-1：8传代；每周2-3次。
为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在-70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键，在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内，水晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。冻存细胞的复苏：冻存细胞较脆弱，要轻柔操作。冻存细胞要快速融化，并直接加入完全生长培养基中。若细胞对冻存剂(DMSO或甘油)敏感，离心去除冻存培养基，然后加入完全生长培养基中。直接铺板方法：取出贮存细胞，37℃水浴中快速融化；直接用完全生长培养基铺板细胞。1ml冻存细胞使用10~20ml完全生长培养基。进行活细胞计数，细胞接种应该至少在3×10(5)活细胞/ml；培养细胞12到24小时，更换新鲜的完全生长培养基，去除冻存剂。离心方法：取出贮存细胞，37℃水浴中快速融化；把1到2ml冻存细胞加入到大约25ml完全生长培养基，轻轻混匀；以大约80x离心2到3分钟；弃去上清。在完全生长培养基轻轻再次悬浮细胞，并且进行活细胞计数。细胞铺板，细胞接种应该至少为3×10(5)活细胞/ml。细胞的分化：一个成年人全身细胞总数约1012个，可以区分为200多种不同类型的细胞：形态结构，代谢，行为，功能等各不相同。追根溯源，这么多种细胞均来自一个受精卵细胞。所以，通常把发育过程中，细胞后代在形态、结构和功能上发生差异的过程称为细胞分化。细胞分化发生在胚胎阶段，也发生在胎儿出生以后，乃至成人阶段。例如，人体血细胞的产生和分化，这个过程在人的一生中一直持续着。由旺盛生长不断分裂的细胞，转入分化，通常从细胞周期中G1期开始时一个确定的点G0点“逃逸”出细胞周期。旺盛生长分裂的细胞和各种分化了的细胞，它们的基因表达和代谢活动各不相同。
YD15细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
小鼠RNA结合蛋白FUS(TLS)ELISA试剂盒，英文名：Mouse TLS ELISA Kit，规格：48T/96T
人着丝粒蛋白F(CENPF)ELISA试剂盒，英文名：Human CENPF ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠颗粒酶M(GZMM)ELISA试剂盒，英文名：Mouse GZMM ELISA Kit，规格：48T/96T
人多配体聚糖3(SDC3)ELISA试剂盒，英文名：Human SDC3 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠副肿瘤性天疱疮(PNP)ELISA试剂盒，英文名：Mouse PNP ELISA Kit，规格：48T/96T
人芳基酸酯酶G(ARSG)ELISA试剂盒，英文名：Human ARSG ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠晚期糖基化终末产物受体(AGER)ELISA试剂盒，英文名：Mouse AGER ELISA Kit，规格：48T/96T
人巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α)ELISA试剂盒，英文名：Human MIP-3α ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠络丝蛋白(RELN)ELISA试剂盒，英文名：Mouse RELN ELISA Kit，规格：48T/96T
Trans-Vag肉汤基础，英文名：Trans-Vag Broth Base，用途：用于链球菌的选择性分离，每100ml添加庆大霉素溶液、啶酮酸溶液各1支
抗生素培养基10号，英文名：Medium 10（Polymyxin Seed Agar），用途：用于微生物方法测定抗生素效价,每100ml添加1支吐温80
多价蛋白胨-酵母膏(PY)培养基，英文名：Poly-Peptone Extract Medium，用途：用于产气荚膜梭菌培养
RVS肉汤，英文名：Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth，用途：用于沙门氏菌选择性增菌
NCTC1469细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SC细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CAMA-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞贴壁斑块；紧凑，很少汇合；细胞传代方法：1：3—1：4传代；每周换液2-3次。
细胞生长特性：悬浮生长
沙门、志贺氏菌增菌培养基，英文名：Salmonella Shigiella Enrichment Broth，用途：用于沙门氏菌、志贺氏菌的选择性增菌
酵母基酸缺陷型合成液体培养基(组酸缺陷/ SC-His)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Fluid Medium without Hist，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
抗生素培养基2号，英文名：Medium 2（Penassay Base Agar），用途：用于微生物方法测定抗生素效
双歧杆菌BS培养基，英文名：Bifidobacterium BS Medium，用途：用于双歧杆菌的分离培养
去氧胆酸盐柠檬酸盐琼脂，英文名：Deoxycholate Citrate Agar，用途：用于沙门氏菌选择性分离
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
细胞形态特性：详见细胞说明书
SNU878细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
GL261细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人凝血酶原肽段1+2(F1+2)ELISA试剂盒，英文名：Human F1+2 ELISA Kit，规格：48T/96T
人成纤维细胞生长因子21(FGF21)ELISA试剂盒，英文名：Human FGF21 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠神经元衍生孤儿受体1(NOR1)ELISA试剂盒，英文名：NOR1 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒，英文名：Mouse SAA ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠多巴胺受体D4(DRD4)ELISA试剂盒，英文名：Mouse DRD4 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞消化过程总结：其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可，吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足够消化细胞（绝大部分1min不到）。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后37度消化。2，什么算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了（虽然没有呈现很广的离散分布）。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性，无论死活的细胞都是如此，你可以尝试，准备的单个细胞悬液，贴壁后观察细胞，仍然是几个几个细胞聚集在一起。一些悬浮培养细胞也是如此，容易聚集，不要去尝试过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液（不要笑，这个是初养悬浮细胞的人常犯的错误，以为悬浮培养就是一个一个分开）。细胞只要能从基质上脱离下来，这个时候即使是成片的（比如Calu-3细胞），吹打不超过20次后（一般10次即可），成小规模聚集（10个细胞左右），是正常的，不要试图再去延长消化时间，或者像有的同学那样吹打1h，等待单细胞悬液出现。比较难消化的细胞（润洗方法5min还不能消化），比如HCT15, LS411和KM12，这样的细胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100mm dish，一次Z多加入500ul，就足够了，一般我加300ul。即使这样难消化的细胞，一般不超过5min，即可见细胞成片移动，就应该停止消化。一些正常细胞也会有难消化的时候，比如tsDC细胞，但也只要用少量胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙状移动。
淋病奈瑟菌增菌培养基基础，英文名：N.gonorrhoeae Enrichment Medium Base，用途：用于淋病奈瑟菌的增菌和转送,每100ml添加1支淋病奈瑟菌培养基添加剂和10ml无菌脱纤维绵羊全血
LC琼脂，英文名：Lactobacillus Casei Agar，用途：——用于干酪乳杆菌的培养和计数
赫奇逊琼脂培养基，英文名：Hutchison Agar Medium，用途：用于纤维素分解菌的测定
Dubos肉汤基础，英文名：Dubos Broth Base，用途：用于结核杆菌的培养,每90ml添加5支Dubos肉汤基础添加剂
抗生素培养基1号，英文名：Medium 1（Penassay Seed Agar），用途：用于微生物方法测定抗生素效价