Neuro-2a小鼠脑神经瘤细胞系 复苏技术经验丰富

Neuro-2a小鼠脑神经瘤细胞系 复苏技术经验丰富
细胞背景资料：详见相关文献介绍
Hep3B细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：4—1：6传代，每周换液2次
PANC-28细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2-1：4传代；每周2-3次。
NCI-H157细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长　；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
C8-D1A [Astrocyte type I clone]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：神经元细胞；细胞传代方法：1：4-1：6传代；每周换液2-3次。
细胞培养实验中常见问题总结：1)一般客户拿到细胞后，应该注意什么？客户收到细胞后先不开盖，放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张)，排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制，慎用Hanks液配制；2)快递细胞多久能到，是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞？我们采用快递发货，一般外地2--3天，寄细胞前请确认当地温度，如果气温低于4度的，则采用邮寄冻存细胞；3)可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活；4)可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
UMUC-14细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CSQT-2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
PA-TU-8988S细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
P388细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
Super Tube细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
4T1.2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
TU686细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SW480 [SW-480]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Rat podocyte细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MPASMC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HRVEC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
PC-3M-1E8细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代方法：1：2-1：4传代；2-3天换液1次
葡萄糖天冬酰胺琼脂，英文名：Glucose Asparagine Agar(Waksman, 1961)，用途：用于链霉菌属的培养鉴定
Karmali氏弯曲杆菌琼脂培养基基础，英文名：Karmali’s Campylobacter Medium，用途：用于弯曲菌的选择性分离培养,每100ml添加1支Karmali氏弯曲杆菌琼脂培养基添加剂（含头孢哌酮、化血红素、万古霉素）
Rogosa SL琼脂，英文名：Rogosa SL Agar，用途：用于口腔、阴道和粪便中乳酸杆菌的检验，每升添加1.32ml冰乙酸和1ml吐温80
甘油甘酸琼脂基础，英文名：Glycerol glycine agar (Okazaki and Okami, 1976)，用途：用于链霉菌属的培养鉴定，每100ml添加2支甘油
精酸双水解酶试验培养基/精酸脱羧酶肉汤，英文名：Double-arginine Hydrolase Test Medium，用途：用于细菌的精酸双水解酶试验
包姜氏琼脂培养基基础，英文名：Bordet-Gengou Agar Medium Base，用途：用于百日咳杆菌的分离,每100ml添加1支甘油、1支青霉素溶液和15ml 无菌脱纤维绵羊全血
SVOG细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MDCK[NBL-2]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
L78细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H526[H526]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
PT-K75细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞样；细胞传代方法：1：2传代
ASH-3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HIEC-6细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SP2/MIL-6细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞样；细胞传代方法：1：2传代
细胞复苏基本方法：1．从液氮罐中取出安剖；有时因安剖未封严，浸入了液氮，取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸，因此应带有防护眼睛和手套。2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上盖并不时摇动，尽快解冻。3．剪开纱布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，净化台上打开盖，用吸管吸出细胞悬液，装入离心管中，再补加10ml培养液，吹打使细胞悬浮。4．低速离心（500～1000转/分）5分钟，取上清后再重复用培养液漂洗、离心。5．加入培养液适当稀释后，再移装入培养瓶中，置温箱培养，次日更换一次培养液后再继续培养。收到T25 flask细胞时，处理方式为：在寄送过程中，为避免起泡造成细胞脱落死亡，T25 flask均加满培养基。请检查flask外观，并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象，若有任何问题，不要打开盖子，请立即通知细胞实验室。将原封之T25 flask静置于37°C，5%CO2培养箱中，使细胞回温至37°C，并让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。隔天后，于无菌操作箱内取出flask内之培养基(取出之培养基可以再使用)，仅留约5-10ml培养基于flask内，依一般培养方式再将细胞置入培养箱中，或细胞已长满盘，则将细胞做传代培养。
PC-12(低分化)细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：多角形；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
人基质金属蛋白酶17(MMP-17)ELISA试剂盒，英文名：Human MMP-17 ELISA Kit，规格：48T/96T
人半胱酸蛋白酶YZ剂/胱抑素C(Cys-C)ELISA试剂盒，英文名：Human Cys-C ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠二辛酸转乙酰基酶(DLAT)ELISA试剂盒，英文名：DLAT ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠紧密连接蛋白1(TJP1)ELISA试剂盒，英文名：Mouse TJP1 ELISA Kit，规格：48T/96T
人早幼粒细胞白血病蛋白(PML)ELISA试剂盒，英文名：Human PML ELISA Kit，规格：48T/96T
人传染性单核细胞增多症IgG(IM IgG)ELISA试剂盒，英文名：Human IM IgG ELISA Kit，规格：48T/96T
人普通转录因子ⅡB(GTFⅡB)ELISA试剂盒，英文名：Human GTFⅡB ELISA Kit，规格：48T/96T
人前折叠蛋白亚基5(PFDN5)ELISA试剂盒，英文名：Human PFDN5 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠色胺酸羟化酶2(TPH2)ELISA试剂盒，英文名：Mouse TPH2 ELISA Kit，规格：48T/96T
10%化钠胰蛋白胨大豆肉汤，英文名：10% Sodium Chloride Tryptone Soy Broth，用途：用于金黄色葡萄球菌的增菌
抗生素检测用培养基Ⅱ，英文名：Antibiotic Examination Medium Ⅱ，用途：用于乳及乳制品中舒巴坦敏感β-内酰胺酶类药物检验
假单胞菌分离琼脂，英文名：Pseudomonas Isolation Agar，用途：用于假单胞菌的检验,每升培养基中添加20ml甘油
M-绿色酵母菌和霉菌肉汤，英文名：m-Green Yeast and Mold Broth，用途：用于饮料中酵母菌和霉菌的检测
KPL-4细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SEG-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NGP细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞生长特性：贴壁生长
巴尔斯氏培养基基础，英文名：Baar,s Medium for Sulfate Reducers，用途：用于脱肠球菌等盐还原细菌的培养，每100ml添加1支35%乳酸钠溶液
EF-18琼脂基础，英文名：EF-18 Agar Base，用途：用于沙门氏菌滤膜法检验,每100ml中添加1支新生霉素溶液
阴沟肠杆菌分离琼脂(ECIA)，英文名：Enterobacter Cloacae Isolation Agar，用途：用于阴沟肠杆菌的分离
Andrade氏糖类肉汤基础，英文名：Andrade′s Carbohydrate Broth Base，用途：用于细菌的糖发酵试验,需加糖
PALCAM琼脂基础，英文名：PALCAM Agar，用途：用于李氏菌分离,每100ml添加多粘菌素B溶液、头孢他啶溶液各1支
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
细胞形态特性：详见细胞说明书
B104细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
BSC40细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人天冬酰胺酶(ASPG)ELISA试剂盒，英文名：Human ASPG ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠整合素连接激酶1(ILK-1)ELISA试剂盒，英文名：ILK-1 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)ELISA试剂盒，英文名：TRAIL ELISA Kit，规格：48T/96T
人速激肽受体2(TACR2)ELISA试剂盒，英文名：Human TACR2 ELISA Kit，规格：48T/96T
人富含半胱酸蛋白61(Cyr61)ELISA试剂盒，英文名：Human Cyr61 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好Z至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：1)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）3)吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净ZDT里备用，加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW264.7，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。
结晶紫中性红胆盐琼脂(含葡萄糖和乳糖)，英文名：Violet Red Bile Agar with Glucose and Lactose，用途：用于肠道菌选择性分离和计数
硅酸盐细菌培养基，英文名：Silicate Bacteria Medium，用途：含琼脂，用于硅酸盐细菌的培养
GAM肉汤，英文名：Glfu Anaerobic Medium Broth，用途：用于厌氧菌的培养
去氧胆酸盐琼脂(DC)，英文名：Desoxycholate Lactose Agar，用途：用于肠道致病菌及大肠杆菌的选择性分离和计数
酵母基酸缺陷型合成液体培养基(组酸缺陷/ SC-His)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Fluid Medium without Hist，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究