货号:
05-440-1B, 05-442-1B
供应商:
上海逍鹏生物科技有限公司
细胞类型:
MSC
规格:
100ml
产品描述 MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium间质干细胞成骨诱导分化培养基,无血清,无异源,即用型完全培养基,诱导hMSC分化为成熟成骨细胞。适用于不同来源的hMSC,如、脂肪组织和脐带组织(hMSC-BM,hMSC-AT,hMSC-CT)。 MSCgo™ Rapid Osteogenic Differentiation Medium 10天以内快速诱导成骨,而MSCgo™ OsteogenicDifferentiation Medium需要14-21天。 成骨结果 hMSC分化成骨后会矿化形成钙结节且有钙分泌,所以可以利用茜素红S (Alizarin Red S) 染色检视分化的成骨细胞。不同的细胞来源 (类型、年龄、代数)所得到的分化效果会有差异 试剂盒组成 MSCgo™间质干细胞成骨诱导分化培养基 产品描述 | 储存 | 货号 | 规格 | MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium | 2-8°C | 05-440-1B | 100ml | MSCgo™ Rapid Osteogenic Differentiation Medium | 2-8°C | 05-442-1B | 100ml | 成骨实验所需材料 维持培养基 MSC NutriStem® XF Medium: BI;05-200-1,05-201-1 MSC Attachment solution XF : BI;05-752-1 分化培养基 MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium:BI;05-440-1 MSCgo™ Rapid Osteogenic Differentiation Medium:BI;05-442-1 染色试剂(可选) Alizarin Red S (ARS), Sigma; A-5533,建议选择Vivacell品Pai,间充质干细胞成骨分化染色试剂盒,货号:C37C00150。 成骨诱导分化操作 - 接种hMSC:用MSC Attachment solution (BI;P/N: 05-752-1,1:100 DPBS 稀释) 预包被24孔盘,每孔加入0.5ml MSC NutriStem® XF,接种6x104细胞 (3x104 cells/cm2)。
- 此处仅为针对成骨诱导的细胞接种操作,MSC NutriStem® XF Medium详细操作步骤请参考其说明书。
- 若使用血清或者其他试剂方式培养MSC,可以略过包被步骤。
- 置于37°C,5% CO2细胞培养箱中培养。
以成骨分化培养基诱导分化 - 培养24h后确认细胞融合度达到80-90%,将维持培养基吸除,每孔(24孔盘)加入0.5ml分化培养基。
- 置于37°C,5% CO2培养箱中培养10-21天,每2-3天换液。
- 注:培养时间越长,会有越多矿化的细胞,ARS染色更明显。
- 成骨评价:使用2%的ARS染色液。
ARS 染色分析 (可选) 制备2% ARS染色液 - 注意:染色液需新鲜制备,或调节到pH 4.1-4.3
- 将2g ARS (Sigma;A-5533) 溶解到100ml 蒸馏水中。
- 用0.1N HCl 或 0.5% (v/v) NH3调节到pH 4.1-4.3。
- 混合均匀,用0.45 μmCA 注射器(如:Minisart16555)过滤。
- 溶液置于2-8°C储存一年。
- 使用前需再确认pH值,如有必要用0.1N HCl 或 0.5% (v/v) NH3调节到pH 4.1-4.3。
ARS 染色过程 - 吸除培养基,用DPBS(BI; 02-023-1)洗一次(1ml/well)
- 固定:吸除DPBS,每孔加入1ml 70% EtOH。
- 室温固定30-60分钟。
- 吸除EtOH,用蒸馏水洗涤3次(1ml/well)。
- 吸除蒸馏水,每孔加入1ml 2% ARS 染色工作液。
- 室温静置30-60分钟。
- 吸除染色液,用1ml 蒸馏水洗涤4次(1ml/well)。
- 每孔加入1ml 蒸馏水避免细胞干燥。
- 观察成骨染色效果、图像采集及进行成骨评价。
半定量ARS 染色 (可选) - 每孔用0.5ml 10% (w/v in DDW) CPC(Cetyl Pyridinium Chloride) 洗涤ARS染料。
- 室温下静置1小时。
550nm 测OD值(10% CPC作为空白对照)。(150μl/well; 96w/p) | | | |
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ARS 染色: