北京重组人载脂蛋白A4(ApoA4)促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京重组人载脂蛋白A4(ApoA4)促销的品Pai：百奥莱博，是优质的重组蛋白产品，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多重组人载脂蛋白A4(ApoA4)等重组蛋白产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：北京重组人载脂蛋白A4(ApoA4)促销
编号：JN0800
规格：10μg|50μg|500μg|1mg
英文名：Recombinant Human Apolipoprotein A-IV
品Pai：百奥莱博
产地：北京
本品由我们的哺乳动物细胞表达系统制备而成，目的基因编码的Glu21-Ser396在C端含有His标签。

Apolipoprotein A-IV/ApoA4质量控制：＞95%(还原性SDS-PAGE)

Apolipoprotein A-IV/ApoA4制剂：冻干品

Apolipoprotein A-IV/ApoA4保存：
冻干蛋白置于-20℃以下可长期保存，室温条件下可稳定保存3周。
复溶蛋白溶液可在4～7℃保存2～7天，可分装后置于-20℃保存三个月。

Apolipoprotein A-IV/ApoA4复溶：
打开试剂管前请先离心。
复溶浓度推荐大于100μg/ml。
冻干蛋白请溶于ddH2O。
复溶后，请根据用量分装冻存，避免反复冻融。

关于Apolipoprotein A-IV/ApoA4：
Apolipoprotein A4 (APOA4) is a secreted protein that belongs to the apolipoprotein A1/A4/E family. Apoa-IV is a major component of HDL and chylomicrons. APOA4 is secreted into circulation on the surface of newly synthesized chylomicron particles. APOA4 play a role in the regulation of appetite and satiety in rodent models. APOA4 involved in chylomicrons and VLDL secretion and catabolism and required for efficient activation of lipoprotein lipase by ApoC-II. In addition, APOA4 is a potent activator of lecithin-cholesterol acyltransferase in vitro.

北京重组人载脂蛋白A4(ApoA4)促销极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·pBalbGST-Tev质粒
编号：JN0109
规格：20次(1μg)
  本质粒以XhoI线性化方式提供，请配合BalbRec PCR产物一步无缝克隆试剂盒使用（CatNo. JN0001）。
  GST是实验室中Z常用的融合标签之一，能够促进目标蛋白质的溶解性和正确折叠。Thormbin作为常用的切除GST标签的蛋白酶，常常出现在目标蛋白中，从而限制了其应用。pBalbGST-Tev质粒在Thombin位点后引入了TEV Protease切点，极大的增加了标签切除的特异性。
  目的基因扩增按常规方法设计引物后，在5´端引物前添加以下序列：CTC TAC TTC CAA GGT； 3´端引物前添加：GTC ACG ATG CGG CCG。3´端引物需要加入终止密码子。

产品组成：

 

组份	规格
pBalbGST-TEV	1ug
BalbRec重组酶	20μl
10×BalbRec重组缓冲液	50μl
Control Insert（50ng/μl）	10μl
TEV protease	100U
附赠
2×pfu MasterMix (快速上样型)	1ml
2×Fast Taq MasterMix(快速上样型)	1ml
DNA Ladder 2000 Plus	100μl

图例一）：pBalbGST-TEV载体表达的Human CBS Recombinant Protein纯化电泳图：
Lane 1: Load sample
Lane 2: Flowthrough
Lane 3: Elution by 10mM GSH
Lane 4: Elution by 10mM GSH
Lane 5: Elution-6M Gua-HCl
Lane 6:蛋白Marker


图例二）：pBalbGST-TEV载体表达的Human CBS Recombinant Protein初步纯化后，30℃下，经不同量的TEV Protease酶切2小时：
Lane 1: No rTEV
Lane 2: 100 units/mg
Lane 3: 400 units/mg
Lane 4: 800 units/mg
Lane 5: Molecular weight marker





质量控制：pBalbGST-TEV线性化载体经过严格的自连测试以及连接效率测试。


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·一步定向无缝克隆试剂盒
编号：JN0001
英文名称：One step directed seamless cloning Kit
规格：20次|100次
  本试剂盒可以不依赖于连接酶，不受载体和目的片段的酶切位点限制，而直接用同源重组的方法，完成目的片段与载体相连接的基因克隆技术。该技术操作简单，PCR产物一步定向克隆，目的片段与载体无缝连接，反应时间短至20分钟，阳性率达到95%以上，让您轻松完成实验。

试剂盒组成：

组份	JN0001-20次
BalbRec重组酶	20μl
10×重组缓冲液	50μl

收到后请立即离心；可在-20℃长期保存，避免反复冻融

产品特点：
1、无酶切位点限制，无多余序列；
2、PCR产物无需酶切，一步克隆；
3、克隆效率高，阳性率＞95%；
4、省时省力，操作简单；
5、多片段定向拼接，妙用无穷；
6、定向克隆，任意载体。

使用方法：
A.线性化载体的获得

线性化载体可以通过两种方法获得，不管采取哪种方法，线性化载体的浓度需>15ng/μl。(高浓度的载体有利于提GX率)。
1、酶切选取合适的位点，单酶切或双酶切皆可，并且5´端突出，3´端突出或平末端均适用本Kit。
2、PCR选取合适的位点，设计正向和反向引物，引物长度一般在18-20bp左右，一般载体长度均大于3kb，建议用高保真的聚合酶扩增（推荐使用百奥莱博pfu DNA聚合酶，货号：JN0016）。为了避免模板质粒DNA对后续试验的影响，建议载体酶切后再用PCR扩增，自连背景更低，阳性率更高。

B.目的片段获得
目的片段通常通过PCR获得。引物设计要保证目的片段两端有至少15bp序列与线性化载体的两端一致，特殊应用引物设计请参照技术手册。为保证PCR扩增的特异性及灵敏度，请尽可能选用pfu等高保真酶（推荐使用百奥莱博pfu DNA聚合酶，货号：JN0016）。PCR每条引物长度至少在35-40bp，包括5´端与载体同源的15bp以及目的片段特异性序列20-25bp，（注意事项：如果是表达载体克隆构建，引物设计完全后，请注意检查读码框的正确）。引物设计方法：使用BalbRec PCR一步定向克隆试剂盒（无缝克隆）时，引物设计是很重要的，在设计引物时同样要遵循引物设计的基本原则，只不过上下游引物要加上15-18bp的载体同源序列。
载体同源序列如何添加主要分以下两种情况：
(1)载体酶切后是5"端突出或平末端，则引物上的同源序列包括5"端突出部分的序列；
(2)载体酶切后是3’端突出，则因无上的同源序列不包含突出部分。（如下图，红色碱基为希望保留原有的酶切位点所额外添加的碱基，不计算在15bp之内。
注：15bp同源序列不要求严格从载体Z末端一届碱基计算，这是载体末端非同源序列将会被删除，同时导致重组效率的下降。当非同源序列达到20bp时，效率下降一半。

BalbRec一步定向克隆试剂盒（无缝克隆）引物设计方法

C.目的片段与载体的重组
1.将目的DNA片段和线性化载体以一定的摩尔比加到管子中进行重组反应
2.混匀后在37℃放置20分钟;
3.立即进行转化，剩余连接液可保存在4℃或-20℃待用。（注意：1.目的片段与载体的摩尔比在3：1-10：1之间，摩尔比低于3：1效率会降低2.反应时间在20-40分钟，时间太长不利于重组反应）

D.转化
建议所使用的感受态细胞效率要达到或>5X106 cfu/μg.
1.冰上融化一管100μl的DH5a感受态细胞，轻弹管壁使细胞重悬起来。加入10μl的反应液到感受态细胞中，轻弹数下，置冰上孵育45分钟。
2.42℃水浴中热激90秒后快速放入冰上5分钟。
3.加入500μl S℃液体培养基，37℃孵育45-60分钟。
4.5k离心3分钟收集菌体，根据需要将一定量的菌体均匀的涂布在含抗生素平板上。

E.阳性克隆鉴定
一般的，我们建议采用菌落PCR进行阳性克隆鉴定(推荐使用百奥莱博2x specificTM PCR MasterMix货号：JN0034)。
鉴定引物的选择：为避免假阳性结果，我们建议一条引物为载体特异性引物，另一条引物为目的片段特异性引物。

常用反应体系

试剂	体积
10×重组缓冲液	2μl
BalbRec重组酶	1μl
线性化载体（>15ng/μl）	N
插入片段	N
ddH2O	至20μl

注：载体与目的片段的摩尔比在1:3～1:10之间，如果摩尔比低于1:3，转化效率会下降。

储存条件：-20℃，避免反复冻融


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SV1003 Phusion GC 反应缓冲液套装
BTN130976 Oligo(dT)再生溶液 Oligo(dT) Recharger
WE0174 新型植物基因组DNA提取试剂盒 NewPurify Plant Genomic DNA Extraction Kit
SV0519 NcoI限制性内切酶 NcoI Restriction Endonuclease
SV1652 pCMV-CLuc 2 对照质粒
BTN130923 LAMP扩增阳性对照 LAMP Positive Control
YT186 EMSA结合缓冲液(Gel-Shift结合缓冲液)(5X) EMSA/Gel-Shift Binding Buffer,5X
SY0101 SMAD-Luc荧光素酶报告基因质粒 SMAD luciferase reporter plasmid
HR0374 1M Tris (pH6.8) Tris 1M (pH6.8)
BTN140621 基因转染增强剂 Hexadimethrine bromide
YT596 唾液酸醛缩酶 N-Acetyl-D-Neuraminic Acid Aldolase (Crude Enzyme)
SY0462 多聚L-赖*酸溶液(5mg/ml)(分子量15万～30万) Poly-L-lysine (5mg/ml), Mw 150,000-300,000
KFS223 Caspase-2蛋白检测试剂盒 Caspase-2 Detection Assay(Western Blot)
RFT094 2×SYBR qPCR MasterMix
SY0250 *化乙锭溶液(10 mg/ml) EB(10 mg/ml in water)
BTN70703 柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒 Mycobacteria DNA column extraction kit
WE0278 蛋白快速染色液 FastStain Protein Staining Reagent 
SV0813 PI-PspI归位内切酶 PI-PspI归位内切酶
ALH611 长片段DNA超速PCR MasterMix Fast & Long DNA PCR MasterMix
BTN90801B 一站式TA克隆试剂盒(含感受态细胞) One-Stop TA Cloning Kit(B)

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