北京JN1270型重组人TPK1(硫胺素焦磷酸激酶1)哪里卖

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名称：北京JN1270型重组人TPK1(硫胺素焦磷酸激酶1)哪里卖
编号：JN1270
规格：10μg|50μg|500μg|1mg
英文名：Recombinant Human Thiamin pyrophosphokinase 1
品Pai：百奥莱博
产地：北京
本品由我们的哺乳动物细胞表达系统制备而成，目的基因编码的Met1-Ser243在C端含有His标签。

TPK1质量控制：＞95%(还原性SDS-PAGE)

TPK1制剂：液体

TPK1保存：收到货后请置于-20℃，可保存6个月，避免反复冻融。

关于TPK1：
Thiamin pyrophosphokinase 1 (TPK1), belongs to the thiamine pyrophosphokinase family. TPK1 exists as a homodimer, and is detected in heart, kidney, testis, small intestine and peripheral blood leukocytes, and at very low levels in a variety of tissues. TPK1 can catalyze the phosphorylation of thiamine to thiamine pyrophosphate. It can also catalyze the phosphorylation of pyrithiamine to pyrithiamine pyrophosphate.

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·一步定向无缝克隆试剂盒
编号：JN0001
英文名称：One step directed seamless cloning Kit
规格：20次|100次
  本试剂盒可以不依赖于连接酶，不受载体和目的片段的酶切位点限制，而直接用同源重组的方法，完成目的片段与载体相连接的基因克隆技术。该技术操作简单，PCR产物一步定向克隆，目的片段与载体无缝连接，反应时间短至20分钟，阳性率达到95%以上，让您轻松完成实验。

试剂盒组成：

 

组份	JN0001-20次
BalbRec重组酶	20μl
10×重组缓冲液	50μl

收到后请立即离心；可在-20℃长期保存，避免反复冻融

产品特点：
1、无酶切位点限制，无多余序列；
2、PCR产物无需酶切，一步克隆；
3、克隆效率高，阳性率＞95%；
4、省时省力，操作简单；
5、多片段定向拼接，妙用无穷；
6、定向克隆，任意载体。

使用方法：
A.线性化载体的获得

线性化载体可以通过两种方法获得，不管采取哪种方法，线性化载体的浓度需>15ng/μl。(高浓度的载体有利于提GX率)。
1、酶切选取合适的位点，单酶切或双酶切皆可，并且5´端突出，3´端突出或平末端均适用本Kit。
2、PCR选取合适的位点，设计正向和反向引物，引物长度一般在18-20bp左右，一般载体长度均大于3kb，建议用高保真的聚合酶扩增（推荐使用百奥莱博pfu DNA聚合酶，货号：JN0016）。为了避免模板质粒DNA对后续试验的影响，建议载体酶切后再用PCR扩增，自连背景更低，阳性率更高。

B.目的片段获得
目的片段通常通过PCR获得。引物设计要保证目的片段两端有至少15bp序列与线性化载体的两端一致，特殊应用引物设计请参照技术手册。为保证PCR扩增的特异性及灵敏度，请尽可能选用pfu等高保真酶（推荐使用百奥莱博pfu DNA聚合酶，货号：JN0016）。PCR每条引物长度至少在35-40bp，包括5´端与载体同源的15bp以及目的片段特异性序列20-25bp，（注意事项：如果是表达载体克隆构建，引物设计完全后，请注意检查读码框的正确）。引物设计方法：使用BalbRec PCR一步定向克隆试剂盒（无缝克隆）时，引物设计是很重要的，在设计引物时同样要遵循引物设计的基本原则，只不过上下游引物要加上15-18bp的载体同源序列。
载体同源序列如何添加主要分以下两种情况：
(1)载体酶切后是5"端突出或平末端，则引物上的同源序列包括5"端突出部分的序列；
(2)载体酶切后是3’端突出，则因无上的同源序列不包含突出部分。（如下图，红色碱基为希望保留原有的酶切位点所额外添加的碱基，不计算在15bp之内。
注：15bp同源序列不要求严格从载体Z末端一届碱基计算，这是载体末端非同源序列将会被删除，同时导致重组效率的下降。当非同源序列达到20bp时，效率下降一半。

BalbRec一步定向克隆试剂盒（无缝克隆）引物设计方法

C.目的片段与载体的重组
1.将目的DNA片段和线性化载体以一定的摩尔比加到管子中进行重组反应
2.混匀后在37℃放置20分钟;
3.立即进行转化，剩余连接液可保存在4℃或-20℃待用。（注意：1.目的片段与载体的摩尔比在3：1-10：1之间，摩尔比低于3：1效率会降低2.反应时间在20-40分钟，时间太长不利于重组反应）

D.转化
建议所使用的感受态细胞效率要达到或>5X106 cfu/μg.
1.冰上融化一管100μl的DH5a感受态细胞，轻弹管壁使细胞重悬起来。加入10μl的反应液到感受态细胞中，轻弹数下，置冰上孵育45分钟。
2.42℃水浴中热激90秒后快速放入冰上5分钟。
3.加入500μl S℃液体培养基，37℃孵育45-60分钟。
4.5k离心3分钟收集菌体，根据需要将一定量的菌体均匀的涂布在含抗生素平板上。

E.阳性克隆鉴定
一般的，我们建议采用菌落PCR进行阳性克隆鉴定(推荐使用百奥莱博2x specificTM PCR MasterMix货号：JN0034)。
鉴定引物的选择：为避免假阳性结果，我们建议一条引物为载体特异性引物，另一条引物为目的片段特异性引物。

常用反应体系

试剂	体积
10×重组缓冲液	2μl
BalbRec重组酶	1μl
线性化载体（>15ng/μl）	N
插入片段	N
ddH2O	至20μl

注：载体与目的片段的摩尔比在1:3～1:10之间，如果摩尔比低于1:3，转化效率会下降。

储存条件：-20℃，避免反复冻融


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·重组小鼠P-Cadherin
编号：JN1454
英文名称：Recombinant Mouse Cadherin-3
规格：10μg|50μg|500μg|1mg
本品由我们的哺乳动物细胞表达系统制备而成，目的基因编码的Glu100-Gly647在C端带有Fc标签。

P-Cadherin质量控制：＞95%(还原性SDS-PAGE)

P-Cadherin制剂：冻干品

P-Cadherin保存：
冻干蛋白置于-20℃以下可长期保存，室温条件下可稳定保存3周。
复溶蛋白溶液可在4～7℃保存2～7天，可分装后置于-20℃保存三个月。

P-Cadherin复溶：
打开试剂管前请先离心。
复溶浓度推荐大于100μg/ml。
冻干蛋白请溶于ddH2O。
复溶后，请根据用量分装冻存，避免反复冻融。

关于P-Cadherin ：
Cadherin-3 (CDH3) is a single-pass type I membrane protein that belongs to the cadherin superfamily. CDH3 is a calcium-dependent cell-cell adhesion glycoprotein comprised of five extracellular cadherin repeats, a transmembrane region, and a highly conserved cytoplasmic tail. CDH3 is expressed in some normal epithelial tissues and in some carcinoma cell lines. CDH3 preferentially interacts with themselves in a homophilic manner in connecting cells. CDH3 is involved in loss of heterozygosity events in breast and prostate cancer. Mutations in CDH3 have been associated with congential hypotrichosis with juvenile macular dystrophy.

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