北京SPINK3 mRNA原位杂交试剂盒说明书

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖北京SPINK3 mRNA原位杂交试剂盒说明书在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：北京SPINK3 mRNA原位杂交试剂盒说明书
编号：ZN1307
规格：100T
品Pai：百奥莱博
产地：北京
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液2ml；
3.SPINK3 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液2ml；
4.封闭液5ml；
5.生物素化鼠抗Digoxin5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：Z重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以YZRNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗Digoxin：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
SPINK3的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

想要了解更多关于北京SPINK3 mRNA原位杂交试剂盒说明书的价格、品Pai、厂家、说明书、促销信息，请和我们联*(代"系")。此外我公司还销*(代"售")下面的产品：
BTN121208 液体样品蛋白纯化回收试剂盒 Liquid Sample Protein Purification Kit
ALH424 EB去除剂 EB Eraser
SV0908 LongAmp Taq PCR 试剂盒
WE0329 抗c-Myc标签抗体琼脂糖介质 Anti-Myc Mouse Monoclonal Antibody Agarose Resin
BTN60904 一站式RNA电泳套装 One-Stop RNA Electrophoresis Pack
SY0300 考马斯亮蓝G250 Coomassie Brilliant Blue G250
RFT195 蛋白酶YZ剂混合物(哺乳动物蛋白提取用)  Protease inhibitor cocktail  for mammalian cell and tissue extracts
KFS273 Bafilomycin A1 (自噬YZ剂，质子泵YZ剂) Bafilomycin A1
SY0510 细胞增殖示踪荧光探针 CFDA, SE
YT890 DAPI溶液(5mg/ml) DAPI Solution
BTN131196 Therminator II DNA聚合酶 Therminator II DNA Polymerase
HR0459 Hoechst33258染色试剂盒 Hoechst33258 Staining Kit
SY0152 慢病毒报告基因阳性对照 Lentivirus Luciferase Reporter positive control
YT236 OCT-1凝胶迁移突变探针(1.75μM) OCT-1 Mutation Probe For EMSA(1.75μM)
BTN100103B 裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒 S.pombe Chemical Competent Cell Preparation Kit
北京SPINK3 mRNA原位杂交试剂盒说明书关键词：百奥莱博,SPINK3 mRNA原位杂交试剂盒,ZN1307

WE0225 RNase A溶液(100mg/ml) RNase A(100mg/ml)
BTN3670 动物DNA提取试剂盒 Animal DNA extraction kit
SV1110 8-氧代鸟嘌呤 DNA 糖基化酶 Fpg 8- oxygen generation guanine DNA glycosylation enzyme Fpg
RFT032 植物RNA提取试剂 Plant RNA Extraction Reagent
KFS170 Fluo-4, AM(Ca2+ GPCR分析-*离子指示探针) Fluo-4, AM
SY0407 12ml重力层析空柱 Gravity Chromatography Columns
SV0244 BssSI限制性内切酶 BssSI Restriction Endonuclease
BTN101123 PVDF膜(0.45μm，13×20cm) PVDF Membrane (Millipore)
"
SY0048 dNTP混合溶液(25 mM each) dNTP Mix (25 mM each)
YT129 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒 Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit
BTN130918 dITP溶液(2.5mM) dITP Solution(2.5mM)
SV1597 CpG 甲基化的 Jurkat 基因组 DNA
YT336 蛋白转运YZ剂(Monensin) Protein Transport Inhibitor
WE0121 Taq酶抗体 Taq Antibody
BTN130969 冷冻型血液RNA保存液 Blood RNA freezing preservation solution
SV0897 OneTaq 2X Master Mix（提供 GC 缓冲液）
WE0324 BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒(WB IHC) BCIP/NBT Kit(40×)
KFS068 10×WB洗涤液(PBS) Western Blot Wash Buffer(10×) in PBS
SY0295 pUM19-T Vector TA克隆载体
RFT190 5×TBE
北京SPINK3 mRNA原位杂交试剂盒说明书关键词：百奥莱博,SPINK3 mRNA原位杂交试剂盒,ZN1307

YT885 免疫染色洗涤液(10X) Immunol Staining Wash Buffer(10×)
BTN131182 Sulfolobus DNA聚合酶IV Sulfolobus DNA Polymerase IV
BTN70503A DNA marker(50-500bp) DNA ladder(50-500bp)
SV1437 PURExpress Δ RF123 试剂盒
YT231 NF-κB凝胶迁移突变探针(1.75μM) NF-κB Mutation Probe For EMSA(1.75μM)
BTN130204 Oligo快速复性液 Oligo Rapid Renaturing Solution
SY0556 *黄绿素，超纯级 Calcein, AM, Ultrapure Grade
SV0653 SacII限制性内切酶 SacII Restriction Endonuclease
WE0220 X-gal溶液(20mg/ml) X-gal Solution(20mg/ml)
HR0522 胰蛋白酶溶液(1%) Trypsin solution (1%)
SY0191 Pax6-GFP报告基因质粒 Pax6 GFP Reporter Plasmid
RFT051 宽分子量蛋白Marker(10～200KD) Broad Molecμlar Weight Protein Marker

北京百莱博科技有限公司专业生产基因结构和功能产品，欢迎来电咨询选购北京SPINK3 mRNA原位杂交试剂盒说明书。