北京Orexin receptor mRNA原位杂交试剂盒哪里卖

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名称：北京Orexin receptor mRNA原位杂交试剂盒哪里卖
编号：ZN1047
规格：100T
品Pai：百奥莱博
产地：北京
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：human,rat,mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液2ml；
3.Orexin receptor mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液2ml；
4.封闭液5ml；
5.生物素化鼠抗Digoxin5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：Z重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以YZRNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗Digoxin：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
Orexin的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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SV0635 PvuII-HF限制性内切酶 PvuII-HF Restriction Endonuclease
WE0215 5×TBE
HR0517 胰蛋白酶-EDTA溶液(0.25%:0.02%,含酚红) Trypsin -EDTA solution (0.25%: 0.02%, phenol red)
SY0186 AARE-GFP报告基因质粒 AARE GFP Reporter Plasmid
RFT046 超低分子量蛋白Marker III(3.4～100kd) μltra Low Molecμlar Weight Protein Marker III
KFS160 线粒体橙色荧光探针 MitoOrange
ALH078 高纯度质粒小量提取试剂盒(柱式) High purity plasmid small amount rapid extraction kit
YT528 DEPC水(DNase、RNase free) Water Treated With DEPC
BTN131143 AMPPD
BTN80926 柱式真菌DNA大量提取试剂盒(玻璃珠法) Fungus DNA Column large-scale extraction kit(Glass bead method)
SV1176 ΦX174 RF I DNA
YT119 细胞凋亡阳性对照试剂盒 Apoptosis Inducers Kit
BTN131117 DNA包被溶液 DNA Coating Solution
SY0444 红色荧光标记人源高密度脂蛋白 Human DiI-High Density Lipoprotein, (Human DiI-HDL)
SV0332 EciI限制性内切酶 EciI Restriction Endonuclease
WE0111 BaldStar Taq DNA Polymerase BaldStar Taq DNA Polymerase
SY0778 免疫染色用一抗二抗稀释液 Primary&Secondary Antibody Diluent for Imunostaining
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·小鼠Flt3配体(Flt3L)检测试剂盒
编号：ZN2616
英文名称：Mouse Flt3 ligand ELISA Kit
规格：96T
本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法，用于体外定量分析小鼠血清、细胞裂解液或细胞培养上清中Flt3L的含量。预先包被的抗体为Flt3L多克隆抗体。检测相抗体为Flt3L单克隆抗体，经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的Flt3L呈正相关。


FLT-3L是胚胎肝脏酪*酸激酶受体-3配体，属于I型跨膜蛋白。FLT-3L在干细胞和免疫系统的正常发育过程中起着重要作用。小鼠FLT-3L广泛分布于、淋巴结、的组织细胞中。

检测指标：Flt3 ligand；Flt3L；FLT-3L；FMS样酪*酸激酶3配体
检测范围：31.2pg/ml～2000pg/ml
特异性：系统和其它细胞因子无交叉反应
敏感性：＜4pg/ml

产品组成：

 

组分	规格	数量
预包被抗小鼠Flt3L抗体的96孔板	96T	1板
重组小鼠Flt3L标准品(冻干)	10ng/管	2管
生物素标记抗小鼠Flt3L(100X)	130μl	1管
亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)(100X)	130μl	1管
样品稀释液	30ml	1瓶
抗体稀释液	12ml	1瓶
ABC稀释液	12ml	1瓶
TMB显色液	10ml	1瓶
TMB终止液	10ml	1瓶
洗涤缓冲液(25X)	20ml	1瓶
封板膜		4张

储存条件：2-8℃（频繁使用时），-20℃（长时间不用时）
有效期： 6个月(4℃)；12个月（-20℃）

参考标准曲线数据：(取自某一批次质检数据，仅供参考，用户需要自己建立标准曲线)

浓度(pg/ml)	0	31.2	62.5	125	250	500	1000	2000
OD值	0.024	0.049	0.071	0.109	0.280	0.518	1.239	2.236

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SV0978 OneTaq 一步法 RT-PCR 试剂盒
YT019 琼脂糖 Agarose
BTN90602H DNA marker(φX174 DNA/HaeIII) DNA ladder(φX174 DNA/HaeIII)
SV1419 pMAL-c5X 载体
SV0061 AscI RE-Mix限制性内切酶 AscI RE-Mix Restriction Endonuclease
KFS303 双荧光素酶报告基因检测试剂盒 Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit
SY0544 支原体去除试剂2(100X) Antibiotic Solution 2(100X)
YT921 Bcl-2YZ剂(ABT-737) Bcl-2 Inhibitor
BTN130646 尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG) Uracil DNA Glycosylase
HR0506 细菌活性检测试剂盒-AlamarBlue Bacterial activity assay kit -AlamarBlue
SY0181 EGR1-GFP报告基因质粒 EGR1 GFP Reporter Plasmid
YT266 YY1凝胶迁移突变探针(1.75μM) YY1 Mutation Probe For EMSA(1.75μM)
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ALH180 尿液DNA提取试剂盒 Urine DNA Extraction Kit
YT511 RNase H Ribonuclease H
WE0254 BL21(DE3)pLysS感受态细胞 BL21(DE3)pLysS Competent Cell
BTN130956 柱式酱油DNA提取试剂盒 Soy sauce DNA column extraction kit
SV1168 Tth RecA 蛋白 RecA Tth protein

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