Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(大鼠IgG)供应

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名称：Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(大鼠IgG)供应
编号：ZN1934
规格：1盒
品Pai：百奥莱博
产地：北京
工作原理：聚合标记法是一种酶标记方法，其敏感性比普通酶标法有明显提高。用于 Western Blotting的免疫学检测，更能体现其优点。不仅能大量地节约一抗，更重要的是使条带更清晰，甚至能检测出普通酶标法无法检测出的微量条带。DAB 是过氧化物酶Z重要的显色剂之一，反应产物为不溶于水、二甲*和醇的棕色沉淀物，适合于免疫印迹的显色反应。本产品采用特殊配方，具有操作简单，储存稳定，信号灵敏度高，持续时间长，背景低，结果易保存等优点。
保存条件：－20℃冷冻保存。DAB 显色试剂应避光保存。
有效期：一年。
试剂盒的内容：
(1)封闭试剂：10 g 蛋白干粉×2 包。
(2)浓缩抗体稀释液：20 ml×1 瓶，为10倍浓缩液。
(3)聚合过氧化物酶标记兔抗大鼠 IgG0.2ml，效价 1：200-400。亲和纯化抗体，经聚合法标记过氧化物酶。
(4)DAB 显色试剂，含：
显色剂 A：DAB×40倍浓缩液，3ml。
显色剂 B：H2O2×40倍浓缩液，3ml。
显色剂 C：×40倍 TBS 浓缩缓冲液，3ml。
使用说明：
需要而未提供的试剂和器材：
1．转印了蛋白样品的NC 膜或 PVDF 膜：通过 SDS-PAGE 凝胶电泳分离蛋白质抗原，将 PAG 胶上的蛋白质转印到硝酸纤维素膜(NC 膜)或 PVDF 膜上。
2．稀释缓冲液：使用中性稀释缓冲液即 0.02 M PBS(AR0030)或 0.02M TBS(AR0144)配制封闭液和抗体稀释液。0.02 M PBS(pH7.2-7.6)：1000 ml 蒸馏水加 Na2HPO4 2.8 g ，NaH2PO4 0.4 g，NaCl 8.5 g。如果用的是含水磷酸盐，应加上分子式中水的含量。0.02M TBS(pH7.2-7.6)：1000ml 蒸馏水中加 Tris 2.42g,NaCl 9g; 纯乙酸或浓盐*(代"酸")调节 pH 值(7.2-7.6)。
3．洗涤缓冲液：每 1000ml 中性稀释缓冲液中加入 0.5 ml Tween20 即可。
4．一抗：选择适合的一抗，用抗体稀释液稀释相应的一抗，一般特异性抗体工作浓度为1μg/ml,具体的稀释度取决于特异性的一抗和膜上的抗原的量。
5．摇床：膜的封闭、抗体孵育和洗涤都需平稳摇晃，需在摇床上操作。
6．相机：记录结果。
操作程序：
1．通过聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳分离蛋白样本和分子量标准。
2．将蛋白样本转移至硝酸纤维素膜或 PVDF 膜上。
3．封闭硝酸纤维膜：用封闭蛋白干粉 2 g,加稀释缓冲液 100 ml，20-37℃封闭 1-2 小时。用量以浸没整张膜为准。
4．用洗涤缓冲液洗涤硝酸纤维素膜 5分钟,1次。
5．配制抗体稀释液：取 90 ml 稀释缓冲液加 1 g 封闭蛋白干粉和 10 ml浓缩抗体稀释液即可。一抗、二抗均用此稀释液稀释。
6．硝酸纤维膜孵育一抗：用抗体稀释液稀释相应的一抗，一般特异性抗体浓度 1μg/ml,20-37℃孵育2 小时左右。如果缺乏特异性的条带或阳性不强，应提高一抗的浓度；如果有非特异性的条带，应提高一抗的稀释度。
7．用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维素膜 3次,每次 5分钟。
8．硝酸纤维膜孵育二抗：用抗体稀释液稀释相应的酶标二抗，效价 1：200-400。37℃孵育一个半小时左右。用户可根据实际染色情况对稀释度做适当调整。
9．用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维膜 4次,每次 5分钟。
10．DAB 显色:使用 DAB 显色试剂。按每 2 ml 蒸馏水加显色剂 A，B，C 各１滴，混匀。混匀后加至膜上。室温显色。一般显色1－30分钟。
若无背景出现则可继续显色。显色后用蒸馏水洗涤以终止反应。
11．观察，照相。
注意事项：
1．试剂频繁使用时置４℃，不常使用时置－20℃。显色剂 A 需置－20℃冷冻保存。如有结晶析出，应确保结晶完全溶解再行使用。
2．显色工作液应新鲜配制。

Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(大鼠IgG)供应正在火爆，除此之外，为您推荐下别产品：

·TRPC5 mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN1439
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：human
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.TRPC5 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗Digoxi*(代"n") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：Z重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以YZRNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗Digoxi*(代"n")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
TRPC5的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。


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·小鼠基质金属蛋白酶9(MMP-9)检测试剂盒
编号：ZN2708
英文名称：Mouse Matrix metalloproteinase 9 ELISA Kit
规格：96T
本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法，用于体外定量分析小鼠血清、血浆、细胞裂解液、细胞培养上清中MMP9的含量。预先包被的抗体和检测相抗体都是MMP9亲和纯化级多克隆抗体。检测抗体经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成的黄色。颜色的深浅和样品中的MMP9呈正相关。

MMPs是依赖锌和*的内肽酶，能够降解细胞外基质的所有成分。它们在许多生理过程中发挥重要作用，如胚胎发育、组织成型、复制、再生等。它们参与很多病理过程如关节炎、癌症、心血管疾病。新合成 MMPs 的量主要由复制水平控制。MMPs的活性主要由酶原的活化和其YZ蛋白质（TIMPs）所调节。MMP-9 可降解一系列基质成分如Ⅳ,Ⅴ,ⅩⅣ型胶原，以及α2-macroglobulin, vitronectin, proteoglycan。所检测MMP-9包括酶原和活性酶。

检测指标：MMP9；MMP-9；92 kDa gelatinase
检测范围：156pg/ml～10000pg/ml
特异性：系统和其它细胞因子无交叉反应
敏感性：＜5pg/ml

产品组成：

 

组分	规格	数量
预包被抗小鼠MMP9抗体的96孔板	96T	1板
重组小鼠MMP9标准品(冻干)	10ng/管	2管
生物素标记抗小鼠MMP9(100X)	130μl	1管
亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)(100X)	130μl	1管
样品稀释液	30ml	1瓶
抗体稀释液	12ml	1瓶
ABC稀释液	12ml	1瓶
TMB显色液	10ml	1瓶
TMB终止液	10ml	1瓶
洗涤缓冲液(25X)	20ml	1瓶
封板膜		4张

储存条件：2-8℃（频繁使用时），-20℃（长时间不用时）
有效期： 6个月(4℃)；12个月（-20℃）

参考标准曲线数据：(取自某一批次质检数据，仅供参考，用户需要自己建立标准曲线)

浓度(pg/ml)	0	156	312	625	1250	2500	5000	10000
OD值	0.080	0.138	0.186	0.289	0.486	0.808	1.434	2.277

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SNM213 血乙醇测定试剂盒(乙醇脱*酶法) Blood ethanol (ALC) assay kit
GL0309 DAPI染色液(5ug/ml) 10ml|50ml
GL1463 包涵体分离缓冲液 500ml
GL1074 血清封闭剂 50ml
SNM011 脂肪酶测定试剂盒(微板法) Lipase assay kit
GL0021 细胞松弛素B储存液(1mg/ml) Cytochalasin B 1mg/ml 1ml
GL1217 CTAB抽提液 500ml
GL0790 焦油紫染色液 0.06%|0.1% 100ml
GL1891 人前白蛋白(PA)检测试剂盒(透射微板法) 100T
SK080 植物*态氮检测试剂盒 Plant ammonia nitrogen detection kit
SNM354 血管通透性测试(伊文思蓝)染液 Vasopermeability （Evan"s Blue）Stain Kit
GL0505 乙酰胆碱酯酶染色液(铅铜硫胆碱法) 3×20ml|3×50ml
GL1642 Tris-HCl缓冲液(pH8.8) 1mol/L 100ml|500ml
SNM471 免疫组化用苏木素染色液 Immunohistochemical stain with hematoxylin
SNM153 总蛋白测定试剂盒(带标准：双缩脲法) Total protein quantitative assay kit
GL0238 细胞核分离试剂盒(蔗糖密度法) 50T
GL1387 PAGE连续蛋白上样缓冲液(5×) 5ml
GL0997 PBS-Triton去污剂 100ml
GL2050 γ-谷*酰基转移酶(GGT)检测试剂盒(重氮微板法) 100T
SK224 酸性土壤SX磷检测试剂盒 Acid soil quick acting phosphorus detection reagent box

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