4%多聚甲醛溶液(含DEPC) 免疫检测

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4%多聚甲醛溶液(含DEPC) 免疫检测的品Pai：百奥莱博，是优质的免疫检测产品，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多4%多聚甲醛溶液(含DEPC)等免疫检测产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：4%多聚甲醛溶液(含DEPC) 免疫检测
编号：ZN1869
规格：500ml
品Pai：百奥莱博
产地：北京
产品用途：组织细胞的固定
使用方法：将组织置于4%多聚甲醛 4℃固定，固定时间与组织厚度成正比，约1mm/小时，固定液的量约为组织体积的20倍以上。
描述：DEPC是内源性RNA酶YZ剂，它可以YZ组织离体时内源性RNA 酶的活性，以防止其对RNA的降解。添加有DEP的多聚甲醛固定液固定的组织既可以用来做免疫组化，也可以用来做原位杂交，不添加的一般只能用于免疫组化。
附加说明：
含DEPC，推荐用于原位杂交等需检测核酸的实验，也可用于免疫组化，细胞凋亡(Tunel)等实验；
为了您的健康，请带口罩手套，在通风橱内操作。

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SNM241 饱和苦味*(代"酸") Saturated picrate
SNM558 DMEM高糖培养基(不含L谷*酰胺，不含丙*(代"酮")酸*) DMEM high glucose medium
GL1753 乙酸*溶液(3mol/L,pH5.2,无菌) 100ml|500ml
GL0645 黏蛋白异染染色液(天青A法) 100ml
GL1077 增强型抗荧光淬灭封片剂 5ml|10ml
SK170 β-半乳糖苷酶检测试剂盒 β-GAL Test Kit
GL1987 低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)检测试剂盒(Sol微板法) 100T
GL0918 亮绿SF染色液(1%) 100ml
GL1315 EDTA溶液(0.5mol/L,pH8.0,RNase free) 100ml|500ml
GL0155 TB固体培养基粉剂(Terrific Broth) 1L
SNM099 线粒体呼吸链复合物IV试剂盒(正铁细胞色素C氧化还原酶) Electron transport chain Complex IV assay kit
GL1182 *化乙锭溶液(EB,RNase free) 1mg/ml|10mg/ml 10ml
GL1568 PKA缓冲液(10×) 100ml
GL0430 Masson三色染色液 7×50ml|7×100ml
SNM301 二氧化碳结合力测试盒(滴定法) Carbon dioxide combining power test kit
SK026 氧化型谷胱甘肽含量检测试剂盒 GSSG Test Kit
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SNM502 浓缩型SABC-Cy3免疫荧光试剂盒(适用人/大鼠/小鼠/山羊/兔中一种) SABC-Cy3 immunofluorescence kit
SK229 土壤全铁检测试剂盒 Soil total iron test kit
GL2056 乳酸脱*酶(LDH)检测试剂盒(二硝基*(代"*")肼微板法) 50T|100T
GL1003 Tris-Maleate缓冲液(0.1mol/L,pH5.08-8.45) 500ml
SK111 磷酸烯醇式丙*(代"酮")酸羧化酶检测试剂盒 PEPC Test Kit
GL0245 HEPES-CHAPS缓冲液(pH7.05) 100ml
SNM159 组织中的铁含量测定试剂盒(比色法) tissue iron assay kit
GL1250 革兰阳性菌裂解缓冲液 100ml
GL1655 Tris*盐缓冲液(1×,pH7.8) 500ml
GL0513 过氧化物酶染色液(联*(代"*")*(代"胺")法) 4×10ml|4×20ml
SNM360 快速姬姆萨染液(适用于血涂片、涂片染色) Wright - Giemsa Stain Kit
GL1502 常规考马斯亮蓝染色液 100ml|500ml
GL1897 植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法) 50T|100T
GL0797 苏丹Ⅳ染色液 3×50ml
SNM561 肌*酸氧化酶(SAO) Sarcosine oxidase
GL0027 盐*(代"酸")万古霉素溶液(10mg/ml) Vancomycin 10mg/ml 10ml
SNM017 维生素B2荧光检测试剂盒 Vitamin B2 fluorescence detection kit
GL1083 Apathy糖胶封片剂 50ml
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·INSERT mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN0742
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.INSERT mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗Digoxi*(代"n") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：Z重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以YZRNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗Digoxi*(代"n")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
INSERT的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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