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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")Cy3标记亲和素(荧光素标记亲和素)销*(代"售"),我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:Cy3标记亲和素(荧光素标记亲和素)销*(代"售")
编号:ZN1984
规格:100μl
英文名:Cy3 Conjugated Avidin
品Pai:百奥莱博
产地:北京
保存条件:置4℃保存一年,注意避光。
试剂内容:1ml CY3 标记Avidin 含 1mg 亲和纯化 Avidin,F/P==3-9/1,0.01M PBS,1%BSA,0.01%Thimerosal。其中Avidin经化学修饰,等电点由pH10降为pH6.5。
标记方法:Cy3 标记采用 Bayer,E.,et al.所研究的方法。(参考文献:Bayer,E.,et al.,Meth.Enzymol.,62,308(1979)
使用方法:
Cy3标记试剂稀释液:PBS 或 TBS 缓冲液,加入试剂级 BSA至1%。
使用上述稀释液,免疫荧光法按 1:50-100 稀释。具体的稀释度须自己预先确定。
稀释后溶液应于当天使用,未用完的应弃置。
CY3在554nm激化,在568-574nm发射荧光,呈鲜艳红色。
注意事项:请离心后,再使用。
欲咨询购买Cy3标记亲和素(荧光素标记亲和素)销*(代"售"),请致电北京百奥莱博科技有限公司,为您提供Z全面周到的产品服务,除此之外,我公司正在促销以下产品:
·PH4/Transciptvariant1 mRNA原位杂交试剂盒
编号:ZN1119
规格:100T
基本信息:
保存条件:4℃保存一年
工作量:100张切片。
有效期:一年。
适用种属:hμman
标记方式:3’—尾段标记
试剂盒中内容:
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.PH4/Transciptvariant1 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂:
原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一.培养细胞和冰冻切片
准备工作:
固定液:4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序:
注意:Z重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以YZRNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛"):37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察:
PH4/Transciptvariant1的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项:
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
Cy3标记亲和素(荧光素标记亲和素)销*(代"售")关键词:Cy3 Conjugated Avidin,Cy3标记亲和素(荧光素标记亲和素),ZN1984
BTN71201 动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol) Animal RNA column extraction kit(Trizol)
SV0927 VentR DNA 聚合酶
WE0399 游离DNA样本保存管(10ml,PET) Cell-Free DNA Storage Tube(PET,10ml)
BTN100875 DNA非变性PAGE上样液 DNA Native PAGE Loading Buffer
SY0308 曲拉通X-100(分子生物学级) Triton X-100, Molecular Biology Grade
SV0004 AbaSI限制性内切酶 AbaSI Restriction Endonuclease
KFS281 Rapamycin 自噬诱导剂,mTORYZ剂 Rapamycin(Sirolimus)
SY0518 植物血凝素 Phytohaemagglutinin M(PHA-M)
YT897 细胞活力检测试剂盒(化学发光法) Luminescent Cell Viability Assay Kit
BTN131209 MMLV逆转录酶(无RNase H活性) MMLV Reverse Transcriptase (RNase H-)
HR0467 Cycloheximide Cycloheximide
SV1451 羊抗兔 IgG 磁珠
YT244 PPAR凝胶迁移探针(10μM) PPAR Probe For EMSA(10μM)
BTN160901 大肠杆菌DH10B电击感受态细胞 E.coli DH10B Electroporation-Competent Cell
ALH141 植物基因组DNA快速提取试剂盒 Plant genomic DNA Extraction Kit
SV0689 SfaNI限制性内切酶 SfaNI Restriction Endonuclease
WE0232 Y染色体人基因组DNA定量试剂盒 Y Human Male DNA Quantification Kit
BTN60501 一管式拭子DNA提取试剂盒 One-tube swab DNA extraction kit
SV1126 核酸内切酶 III(Nth) Nucleic acid enzyme III (Nth)
Cy3标记亲和素(荧光素标记亲和素)销*(代"售")关键词:Cy3 Conjugated Avidin,Cy3标记亲和素(荧光素标记亲和素),ZN1984
SY0417 70mm透析袋(透析分子量14kDa) Dialysis Tube MD77 (Mw14,000)
YT549 L-*丙*酸脱*酶 L-Phenylalanine Dehydrogenase (Crude Enzyme)
BTN140436 非蛋白型Western封堵液 Nonprotein Western Blocking Solution
HR0293 蛋白酶YZ剂混合物(植物蛋白提取) Protease inhibitor mixture (plant protein extraction)
SY0055 鸟苷三磷酸溶液(100 mM)(GTP) GTP Solution(100 mM)
YT137 TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法) Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit
BTN131038 dUTP溶液,100mM dUTP Solution,100mM
SV1604 BG-NH2
YT344 NF-κBYZ剂/抗氧化剂(PDTC) Ammonium pyrrolidinedithiocarbamate
WE0129 一步法RT-PCR试剂盒 UltraRT One Step RT-PCR Kit
BTN70401 软骨RNA提取试剂盒 Cartilage RNA Extraction Kit
SV0913 LongAmp 热启动 Taq DNA 聚合酶
BTN131278 戊二醛磷酸缓冲固定液 Glutaraldehyde Fixative Solution
北京百莱博科技有限公司专业生产分子生物学试剂产品,欢迎来电咨询选购Cy3标记亲和素(荧光素标记亲和素)销*(代"售")。
温馨提示:不可用于临床ZL。