北京2×ligation solution MasterMix厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京2×ligation solution MasterMix厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京2×ligation solution MasterMix厂家
编号：RFT108
规格：150μl
品Pai：百奥莱博
产地：北京
2×ligation solution MasterMix是含有T4 DNA Ligase，ligation buffer的2×MasterMix，实验时，只需加入片段和载体即可进行连接反应。适用于DNA片段和载体DNA的连接以及DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。按照10μl连接体系计算，每次使用5μl，可以使用30次。

注意事项
1、2×ligation solution MasterMix由于含有T4 DNA ligase，使用前冰浴中彻底融化，混匀后使用。
2、为了提高转化效率，转化时建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。

使用方法：
一、DNA片段和载体DNA的连接
(1)粘性末端的连接
1．反应体系：

 

	10μl体系	终浓度
线性载体DNA	xμl	10-50 ng
插入DNA片段	yμl	插入片段：载体=1:1-5:1*
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

注意：载体与插入片段的摩尔数比需要优化：一般vector:insert在1:1～1:5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数：pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如：插入片段2000bp，线性载体为3000bp，如果载体使用量为50ng(0.025pmol)，10μl连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3，则需要2000bp pmol数为0.075pmol，插入片段2000bp的使用量为100ng。
2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：
a.若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或*仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后进行电击转化。
b.若要提高转化子数目，可将连接时间延长至1小时。
(2)平末端的连接
1、反应体系：

	10μl体系	终浓度
线性平末端载体DNA*	xμl	10-50 ng
插入DNA片段	yμl	插入片段：载体=1:1-5:1**
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

注意：
a.平滑末端的载体与 DNA 片段进行连接时，应首先将载体进行去磷酸化处理，以防止其自身环化。
b.载体与插入片段的摩尔数比需要优化：一般vector:insert在1:1~1:5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数：pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如：插入片段2000bp，线性载体为3000bp，如果载体使用量为50ng(0.025pmol)，10μl连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3，则需要2000bp pmol数为0.075pmol，插入片段2000bp的使用量为100ng。
2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：
a.若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或*仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后才能进行电击转化。
b.若要提高转化子数目，可将连接时间延长至1小时。

二、线性DNA的自身环化
1、反应体系：

	10μl体系	终浓度
线性载体DNA	xμl	10-50 ng
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或*仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后才能进行电击转化。

三、接头连接
1、反应体系：

	10μl体系	终浓度
线性DNA	xμl	100-300 ng
磷酸化接头	yμl	0.5-1 μg
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase。连接产物可以直接进行限制性内切酶酶切反应。

储存条件：-20℃

欲咨询购买北京2×ligation solution MasterMix厂家，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供Z全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·小分子蛋白电泳试剂盒
编号：RFT078
英文名称：Small molecule protein electrophoresis Kit
规格：10次
本试剂盒含有小分子蛋白电泳(多肽电泳)全*(代"套")试剂，可以用来检测1-20kd的多肽大小。本试剂盒可配制至少10块常规大小的PAGE胶(8×10cm)。

试剂盒特点：
1 适用范围广：2×多肽电泳缓冲液和2×PAA溶液中不含有SDS，适用于多肽的变性和非变性电泳。
2 分辨率高：凝胶缓冲液独特配方，可以有效分离1-5kD多肽。
3 稳定性高：凝胶缓冲液pH为中性，存放时间长。
4 使用方便：配制凝胶时只需1:1混合2×凝胶缓冲液和2×PAA溶液，加上APS和TEMED即可配制凝胶。

试剂盒组成：

组份	规格	贮存
2×多肽电泳浓缩胶缓冲液	15 ml	4℃
2×多肽电泳分离胶缓冲液	30 ml	4℃
2×PAA溶液 超低浓缩胶用	15 ml	4℃
2×PAA溶液 超低分离胶用	30 ml	4℃
10% APS(干粉)	5 ml	常温
TEMED	0.5 ml	常温
10×Tricine-Tris-SDS缓冲液(10×TTS)	500 ml(干粉)	常温
2×Tricine 上样缓冲液(含还原剂)	1 ml	-20℃
QuickLan蛋白染色液	500 ml	常温

使用方法：

一、10% APS配制：

10% APS配制-5 ml：将APS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。

二、制胶：

I 配制分离胶
1、按照表一将不同体积的成分加入到小烧杯或离心管中混合；立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

表一：(一块1 mm mini胶用量)*

	分离胶	浓缩胶
	18％T /5 ml	5％T /2 ml
2×多肽电泳浓缩胶缓冲液	/	1 ml
2×多肽电泳分离胶缓冲液	2.5 ml	/
2×PAA溶液 超低浓缩胶用	/	1 ml
2×PAA溶液 超低分离胶用	2.5 ml	/
10％APS	45-60μl**	20-30μl
TEMED	5μl	2μl

注：
* 如非必须，不要使用厚度1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75m和1mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
** 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据表二的标准条件调节催化剂的加入量。

表二：超低凝胶制备凝固时间表

环境温度	20℃
	分离胶配制	浓缩胶配制
分离胶配制量	5 ml	-
浓缩胶配制量	-	2 ml
10%APS	50μl	20μl
TEMED	5μl	2μl
凝固时间	5-10 分钟	20-30 分钟

2、在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的无水乙醇层，使凝胶表面保持平整。
3、静置5-10分钟，待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
1、按照表一将不同成分加入到小烧杯或离心管中混合；立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
2、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
3、静置20-30分钟待凝胶聚合

三. 电泳：

10×Tricine-Tris-SDS缓冲液配制：
将10×Tricine-Tris-SDS缓冲液(10×TTS)粉末(Cat No：CB010P)置于一干净的一升烧杯中，加入500ml超纯水，彻底搅拌混匀，不要调节pH，即配成500ml的10×TTS缓冲液。

表三：1×TTS缓冲液配制

	1×TTS配制量 500 ml	1×TTS配制量 1000 ml
10×TTS	50ml	100ml
超纯水	450 ml	900 ml

注：伯乐Mini III电泳槽一次电泳使用500ml 1×TTS缓冲液。

将电泳槽的内槽加满1×TTS缓冲液，轻柔拔出梳子，用1ml移液器将梳孔吹洗干净，将Marker或蛋白样品(已经过2×Tricine上样缓冲液[Cat No：TP050]处理)加入点样孔，稳压电泳(表四)，至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2.5-3个小时。

表四 多肽电泳条件

恒电压	150V
起始电流	60-75mA/板胶
结束电流	15-25mA/板胶
电泳时间	2.5-3小时

四、染色(使用组分9-QuickLan蛋白染色液)：

用前必读：
1、使用前如发现瓶中有少许沉淀，请混匀后使用。
2、以下“使用方法”是针对0.75mm和1.0 mm厚度，10×10cm凝胶染色程序。

使用方法：
1、将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量染色液(以刚刚覆盖过胶面为适)，条带1-2分钟即可见。
2、摇床上常温摇动10-15分钟。
3、观察结果。

注意事项：
1、使用方法中的各种参数仅针对面积8×10cm或10×10cm，厚度0.75mm和1mm的凝胶，如果使用更大面积或更厚的凝胶，请加入更多的染色液并延长染色的时间。
2、常规染色所需的漂洗，固定，脱色步骤都无必要。
3、本染色液可以重复利用1-2次，敏感性会有轻微下降，请延长染色时间。
4、本染色液有轻微腐蚀性，请带手套操作。使用后，请盖好瓶盖，常温密封保存。

储存条件：4℃，有效期一年。


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·DNA Marker II(100～1200bp)
编号：RFT019
规格：100T(2×250μl)
本产品是由6条带状双链DNA条带组成的DNA Marker，适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。含有1×loading buffer，可根据实验需要，直接取2-5μl电泳，使用方便，电泳图像清晰。6条带的大小和含量分别为100bp(50ng/5μl)，300bp(50ng/μl)，500bp(50ng/μl)，700bp(100ng/μl)，900bp(50ng/μl)，1200bp(50ng/μl)。该Marker适用于DNA片段大小的确定和对DNA含量的精确定量。



使用方法：
1. 取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中就行电泳。
注：根据电泳梳子的厚度和宽度确定上样量。每1mm×1mm(厚度×宽度)加样孔上样1μl；窄齿梳子(一般为1mm×2mm)上样2μl；宽齿梳子(一般为1mm×5mm)上样5μl。如果使用厚齿梳子或宽于5mm的梳子，可以适当调整上样量。
2. 建议电泳条件：凝胶浓度为1.5-2.0％，凝胶长度5-7cm，电泳电压4-10v/cm，电泳时间20-25分钟。
3. 通过EB染色后紫外灯下观察条带。

注意事项：
1. 琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响，电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。
2. 请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳，以保证Marker良好的分离效果。

储存条件：-20℃，有效期1年。

·QuickLan蛋白染色液
编号：RFT053
英文名称：QuickLan protein staining solution
规格：500ml
本蛋白染色液是以考马斯亮蓝G-250为主要成分，采用新配方配置而成。可用于SDS-PAGE或非变性PAGE胶(native gel)的快速染色。

特点：
1、方便快捷-不用漂洗，不用加热，不用脱色，不用固定，条带2分钟可见；
2、灵敏度高-检测下限10ng蛋白；
3、兼容性好-适用于变性和非变性胶以及质谱分析；
4、绿色环保-不含甲醇，冰醋酸。

用前必读：
1、使用前如发现瓶中有少许沉淀，请混匀后使用。
2、以下“使用方法”是针对0.75mm厚度，10×10cm凝胶染色程序。

使用方法：
1、将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，用适量蒸馏水漂洗一下。
2、弃蒸馏水，加入适量染色液(以刚刚覆盖过胶面为适)，摇床上常温摇动，根据下表确定染色时间。

待检测蛋白量	染色时间
＞1 μg	2分钟
100ng-1μg	10分钟
10ng-100ng	60分钟

3、观察记录结果。

附：质谱处理程序
1、切下待检蛋白条带置于1.5ml离心管中。
2、加入1ml 30%乙醇或30%丙*(代"酮")(也可用30%醋酸，但会导致蛋白N端酰基化)。
3、处理30分钟。
4、重复步骤2，3直到去除所有染料。一般处理2-3次既能完全去除染料。
5、质谱分析。

注意事项：
1、使用方法中的各种参数仅针对面积8×10cm或10×10cm，厚度0.75mm的凝胶，如果使用更大面积或更厚的凝胶，请加入更多的染色液并延长染色的时间。
2、常规染色所需的漂洗，固定，脱色步骤都无必要。
3、本染色液可以重复利用1-2次，敏感性会有轻微下降，请延长染色时间。
4、本染色液有轻微腐蚀性，请带手套操作。使用后，请盖好瓶盖，常温密封保存。

问题分析：
1、QuickLan染胶的温度是多少？
为达到的染色效果，推荐常温(20-25℃)染色。
2、QuickLan溶液需要低温贮存吗？
QuickLan不需要低温贮存，常温贮存(20-25℃)即可。4-8℃贮存，QuickLan会有结晶生产，37℃温浴融化后可继续使用。
3、QuickLan的染色原理是什么？
QuickLan染色原理与经典考马斯亮蓝G250染色原理相同(与蛋白质中碱性*基酸结合)，优点是更加快速和更高的灵敏度。
4、QuickLan染色后，凝胶可以用蒸馏水保存吗？
可以，蒸馏水保存Z为简单，也可以保存在稀释的冰醋酸中。
5、QuickLan染色后的凝胶能做质谱分析吗？
可以。请参阅“质谱处理程序”
6、QuickLan染色的凝胶能做Weatern Blot吗？
不可以。蛋白的染色是不可逆的，染色的凝胶不能用作下游的转膜操作。
7、QuickLan能重复使用吗？
QuickLan可以重复使用2-3次，但灵敏度有所下降，可以通过延长染色时间来弥补。
8、为什么凝胶过夜染色后条带出现涂抹状拖尾？
QuickLan过夜染色不会对凝胶过度染色。出现抹涂状拖尾原因是上样量太大，因为QuickLan染色灵敏度较高。另外，分子量较小的蛋白在过夜染色中会有扩散现象，我们推荐染色Z好在60分钟内完成。
9、QuickLan有固定凝胶的作用吗？
QuickLan是水系溶液，没有固定凝胶的作用。然而，由于染色会在60分钟内完成，染色前无需对凝胶进行固定。

储存条件：室温，有效期一年。


北京2×ligation solution MasterMix厂家关键词：百奥莱博,2×ligation solution MasterMix,RFT108

KFS286 细胞衰老检测试剂盒(β-半乳糖苷酶检测试剂盒) Senescence β-Galactosidase Staining Kit
YT204 ARE凝胶迁移探针(10μM) ARE Probe For EMSA(10μM)
SV1395 小鼠 RNase YZ剂
BTN3690A 红色DNA上样液，6× DNA Loading Buffer(Red)
WE0404 RNA样本保存液 RNAstore
YT614 RIPA裂解液(强，无YZ剂) RIPA Lysis Buffer without inhibitors
HR0017 糖蛋白富集试剂盒 Glycoprotein enrichment Kit
BTN100102B His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶) One-Stop His-Tagged Protein Miniprep Pack(B)
RFT113 JM109化学感受态细胞 JM109 Competent cell
SY0268 冰冻动植物组织RNA稳定-过渡溶液 ICE Tissue Stabilizer
KFS041 kFluor555标记抗兔免疫荧光染色试剂盒 Immunol Fluorescence Staining Kit with kFluor555-Labeled Goat Anti-Rabbit IgG
BTN131098 生物素化的蛋白G Biotin-Protein G
SV0843 Phusion 超保真 PCR Master Mix( 提供 HF 缓冲液 )
SY0746 辣根过氧化物酶标记链霉亲和素 Peroxidase-conjugated Streptavidin
KFS387 超氧化物歧化酶(SOD)测试盒(总SOD，黄嘌呤氧化酶)
SV0286 BtsIMutI限制性内切酶 BtsIMutI Restriction Endonuclease
SV1557 Furin 蛋白酶

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