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名称:北京肺炎支原体/肺炎衣原体双重荧光PCR检测试剂盒厂家
编号:SYA052
规格:48次/盒
品Pai:百奥莱博
产地:北京
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·猪钩端螺旋体病(LPP)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA437
等级:科研实验专用
规格:48次/盒|96次/盒
一、简介:
本试剂盒用一对钩端螺旋体特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对钩端螺旋体的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途
本试剂盒适用于检测动物内脏、血液等样本中的钩端螺旋体,用于钩端螺旋体感染的辅助诊断,其检测结果仅供参考。
三、试剂盒组成:
组份 | 数量 | 规格 |
Lep反应液(Lep-qPCR MIX) | 1管 | 672μL/管 |
核酸提取液(DNA Extraction) | 2管 | 1.5mL/管 |
酶混合物(Enzymes MIX) | 1管 | 48μL/管 |
阴性对照(NTC) | 1管 | 50μL/管 |
Lep阳性对照(Lep-PTC) | 1管 | 50μL/管 |
四、
储存条件及有效期:本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为12个月。
五、
荧光PCR仪器适用范围:ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、
样品的采集与DNA提取6.1
样品的采集病死动物取心、肝、脾、肺、肾、淋巴结等组织1g;活动物用无菌注射器抽取3~5mL 血液。
6.2 样品前处理
每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g,手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液 100µL于 1.5mL灭菌离心管中;血液样本:取抗凝血下层血细胞 50µL,加入 100µL 双蒸水吹匀。
6.3
DNA提取6.3.1 对上述处理好的样本加入等体积核酸提取液(固体标本加入50μL核酸提取液),100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
6.3.2 DNA的提取也可以采用商业化DNA提取试剂盒。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议在样品制备区域加入阳性对照。
七、
检测步骤:7.1
试剂的准备从试剂盒中取出荧光PCR反应液(Lep-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 | 每个反应加入的量 | N个反应加入的量 |
荧光PCR反应液 | 14µL | N×14µL |
酶混合物 | 1 µL | N×1 µL |
总量 | 15 µL | N×15µL |
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(Lep-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2
qPCR反应条件将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
| 1循环 | 50℃ for 2 min |
预变性 | 1循环 | 95℃ for 10 min |
PCR扩增 | 40循环 | 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec |
在60℃延伸时收集荧光信号 。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、
结果分析:8.1
结果分析条件设定直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的点为准。
8.2
试验成立判定(1)阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2)阳性对照(Lep-PTC):均产生扩增曲线。
(3)以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3
结果判定(1)在试验成立的条件下,Ct值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线,表明Lep核酸阳性。
(2)Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明Lep核酸阴性。
(3)如果Ct值>35,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4)对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行Lep 检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明Lep核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、
注意事项:(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管Z好高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3)PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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·副猪嗜血杆菌(HPS)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA486
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、
简介:本试剂盒用一对副猪嗜血杆菌特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对副猪嗜血杆菌核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、
用途:该试剂盒适用于检测气管分泌物拭子、肺组织、关节液等样本中的副猪嗜血杆菌(HPS),用于副猪嗜血杆菌(HPS)感染的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。
三、
试剂盒组成: 组份 | 数量 | 规格 |
HPS反应液(HPS-qPCR MIX) | 1管 | 672μL/管 |
DNA抽提液(DNA Extraction) | 2管 | 1.5mL/管 |
酶混合物(Enzymes MIX) | 1管 | 48μL/管 |
阴性对照(NTC) | 1管 | 50μL/管 |
HPS阳性对照(HPS-PTC) | 1管 | 50μL/管 |
四、
荧光PCR仪器适用范围:ABI系列、MJ系列、Roche系列,博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
五、
储存条件及有效期:本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
六、样品采集、前处理与
DNA提取6.1 样品采集
病死或扑杀猪,无菌采集肺病变部位或病变/非病变部位交界处的样品;生猪灭菌棉拭子沾取气管分泌物,放入无菌试管中;若有关节囊肿,在囊肿表面常规碘酊消毒,用2mL或5mL灭菌注射器穿刺,无菌吸取1-2mL关节渗出液。
6.2 样品前处理
组织样品:每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g,手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中;关节渗出液:直接取100μL进行提取。
6.3
DNA提取可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
对上述处理好的样本加入40uL核酸提取液,100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议在样品制备区域加入阳性对照。
七、
检测步骤:7.1
试剂的准备从试剂盒中取出荧光PCR反应液(HPS-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下:
试剂 | 每个反应加入的量 | N个反应加入的量 |
荧光PCR反应液 | 14µL | N×14µL |
酶混合物 | 1µL | N×1µL |
总量 | 15µL | N×15µL |
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(HPS-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2
qPCR反应条件将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
1循环 | 50℃ for 2 min |
预变性 | 1循环 | 95℃ for 10 min |
PCR扩增 | 40循环 | 95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec |
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、
结果分析:8.1
结果分析条件设定直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的点为准。
8.2
试验成立判定(1)阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2)阳性对照(HPS-PTC):均产生扩增曲线。
(3)以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3
结果判定(1)在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明副猪嗜血杆菌核酸阳性。
(2)Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明副猪嗜血杆菌核酸阴性。
(3)如果Ct值>35,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4)对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行副猪嗜血杆菌qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明副猪嗜血杆菌核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、
注意事项:(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3)PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
![](http://item.yiqi.com/pic/ConPic/4/SYA052_03.jpg)
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温馨提示:不可用于临床ZL。