特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、YL及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售"),产品线涵盖二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台) 基因结构和功能在内的分子生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台) 基因结构和功能,产品信息:
类别:基因结构和功能
英文名:NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent
产品名 | 产品编号 | 包装规格 |
二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台) | WE0228 | 24次|96次 |
编号:WE0228
规格:24次|96次
英文名:NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent
品Pai:百奥莱博
产地:北京
本试剂盒提供了构建DNA文库需要的酶预混体系及反应缓冲液,包含除接头以外的所有成分,制备的文库可用于Ion torrent PGM、Ion Proton二代测序平台的测序。和常规建库方法相比,该试剂盒将多个步骤进行了合并,省略了多个纯化步骤,因此显著降低了起始模板DNA的Z少需求量,缩短了文库构建时间。另外,试剂盒采用高保真DNA聚合酶进行文库富集,无偏好的PCR扩增,扩大了序列的覆盖区域,可GX的制备用于Ion torrent二代测序平台的DNA文库。
试剂盒组成:
组份 | 24次 | 96次 |
10×End Repair Buffer | 200μl | 800μl |
End Repair Enzyme Mix | 48μl | 192μl |
Ligation and Nick Repair Buffer | 400μl | 2×800μl |
T4 DNA Ligase | 48μl | 192μl |
Bst DNA Polymerase | 48μl | 192μl |
2×HiFidelity PCR Mix | 600μl | 2×1.2ml |
10×Primer Mix(5μM each) | 150μl | 600μl |
自备仪器、试剂和耗材:
1、磁力架:建议使用Life公司磁力架。
2、DNA纯化回收试剂盒:建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)。
3、样本接头引物试剂盒。
4、无水乙醇,EB(10 mM Tris-HCl, pH 8.0),去离子水(pH 在7.0-8.0之间)。
5、反应管:建议使用低吸附的PCR管与1.5ml离心管;枪头:建议使用高质量过滤枪头防止试剂盒、文库样本污染。
实验前准备及重要注意事项:
1、避免试剂盒中Buffer的反复冻融,建议首次使用时将Buffer进行分装保存。酶在使用完应尽快放回-20℃保存,
2、PCR产物因操作不当极易产生污染,导致实验结果不准确,建议将PCR反应体系配制区与PCR产物纯化区隔离,并使用专门的移液器,定期对各实验区域进行清洁。
DNA建库流程示意图:
起始材料:5ng-1μg打断的双链DNA,溶于EB(10 mM Tris-HCl pH 8.0)或去离子水中,DNA纯度要求:OD260/OD 280=1.8-2.0。
DNA末端修复反应:
1、向200μl PCR管中加入以下成分,用枪头将上述溶液轻轻混匀,瞬时离心使所有组分收集到管底。
试剂 | 体积 |
10×End Repair Buffer | 6μl |
End Repair Enzyme Mix | 2μl |
fragmented DNA | X(10ng~1μg) |
RNase-Free Water | Up to 60μl |
2、将管子置入PCR仪中,热盖打开,反应程序如下:
20 min @ 25℃
10 min @ 70℃
Hold on 4℃
Adaptor 连接:
建议使用百奥莱博adaptor进行连接,也可选择使用Life、Kapa公司的adaptor,具体连接方法可参考各公司的产品使用说明书。以下为使用百奥莱博adaptor进行连接的操作步骤:
1、向上述反应液中直接加入以下试剂, 用枪头将上述试剂混匀,短暂离心,使溶液收集到管底。
试剂 | 体积 |
Ligation and Nick Repair Buffer | 10μl |
T4 DNA Ligase | 2μl |
Bst DNA Polymerase | 2μl |
Adaptor A | 7μl |
Adaptor P1 | 7μl |
RNase-Free Water | 12μl |
Total volume | 40μl |
注意:建议Adaptor的加入量与DNA片段的摩尔比为10:1-20:1,具体Adaptor的使用浓度请参照下表。如果DNA量为10-100ng, adaptor建议使用浓度为1μM(小于260 bp)或 0.5μM(300-400 bp)。
插入DNA 量/反应 | 不同大小DNA 建议Adaptor 使用浓度 |
130 bp | 260 bp | 320 bp | 410 bp |
1μg | 10μM | 10μM | 5μM | 5μM |
500ng | 5μM | 5μM | 2.5μM | 2.5μM |
100ng | 1μM | 1μM | 0.5μM | 0.5μM |
2、反应步骤:
15 min @ 25℃
5 min @ 65℃
Hold on 4℃
Adaptor连接DNA片段的选择性回收:
构建不同大小的DNA文库时,需进行DNA片段的选择性回收。若起始样本量低于50ng,不建议进行DNA片段选择性回收。可参考另一种方案,直接进行DNA片段的纯化。建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)进行DNA片段选择性回收。若使用除百奥莱博以外厂家的磁珠,需自行摸索磁珠用量。以下操作步骤采用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒,可选择回收DNA片段长度范围为310-370bp(读长为200bp),反应起始体积为100μl。
1、涡旋振荡MCPure 20秒,使其彻底混匀为均一溶液;
2、将100μl adaptor连接反应缓冲液转移至一新的1.5ml离心管中;
3、加入60μl混合均匀的MCPure,涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟;
4、短暂离心,将离心管置于磁力架上,使磁珠和上清溶液分离,直至溶液澄清(约需5分钟),小心地将上清溶液转移至新的1.5ml离心管中,并弃去磁珠;
注意:不要弃除上清。
5、向上清中加入20μl混合均匀的MCPure,涡旋震荡5秒钟后室温放置5分钟;
6、短暂离心,将离心管放于磁力架上,使磁珠和上清溶液分离,直至溶液澄清(约需5分钟),小心移取上清并弃除,期间避免接触结合目标DNA的磁珠;
注意:不要弃除磁珠。
7、继续保持离心管固定于磁力架上,向离心管中加入250μl新配置的80%乙醇,室温放置30秒,待悬起的磁珠完全吸附后,小心弃除上清;
8、重复步骤7;为彻底移除残留液体,可将离心管短暂离心后,再次移除残留液体。
9、保持离心管固定于磁力架上,室温静置5分钟,使磁珠在空气中干燥;
10、将离心管从磁力架上取下,加入25μl 10 mMTris-HCl(pH 8.0)或去离子水(自备),涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中,室温静置5分钟;
11、短暂离心,将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟),将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中;
另一种方案:Adaptor连接DNA片段的全部回收:
1、涡旋振荡MCPure20秒,使其彻底混匀为均一溶液。
2、将adaptor连接反应液转移至一新的1.5ml离心管中。
3、加入1倍样品体积的MCPure,涡旋震荡5秒钟后,室温静置5分钟。
4、短暂离心,将离心管放于磁力架上,使磁珠和上清溶液分离,直至溶液澄清(约需5分钟),小心吸取上清并弃除,期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
注意:不要弃除磁珠。
5、继续保持离心管固定于磁力架上,向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇,室温放置30秒,待悬起的磁珠完全吸附后,小心弃除上清。
6、重复步骤5。为彻底移除残留液体,可将离心管短暂离心后,再次移除残留液体。
7、保持离心管固定于磁力架上,室温静置5分钟,使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下,加入25μl EB(自备)或去离子水,涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中,室温静置5分钟。
9、短暂离心,将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟),将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中。
PCR富集:
1、在PCR管中加入以下试剂并混匀:
试剂 | 体积 |
连接adaptor后的DNA片段 | 20μl |
2×HiFidelity PCR Mix | 25μl |
10×Primer Mix(5μM each) | 5μl |
总体积 | 50μl |
2、PCR反应条件:
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 30s | |
变性 | 98℃ | 10s | 4~12个循环 |
退火 | 65℃ | 30 s |
延伸 | 72℃ | 30 s |
终延伸 | 72℃ | 5min | |
注:样本量为1ug时,4-6个cycles,样本量100ng时6-8个cycles,样本量为10ng时10-12个cycles。PCR循环数可根据实验进行优化。
PCR产物的纯化:
1、涡旋振荡MCPure20秒,使其彻底混匀为均一溶液;
2、将PCR反应液转移至一新的1.5ml离心管中;
3、加入1倍样品体积的MCPure,涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟;
4、短暂离心,将离心管放于磁力架上,使磁珠和上清溶液分离,直至溶液澄清(约需5分钟)。小心移取上清并弃除,期间避免接触结合目标DNA的磁珠;
注意:不要弃除磁珠
5、继续保持离心管固定于磁力架上,向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇,室温放置30秒,待悬起的磁珠完全吸附后,小心弃除上清。
6、重复步骤5;为彻底移除残留液体,可将离心管短暂离心后,再次移除残留液体。
7、保持离心管固定于磁力架上,室温静置5分钟,使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下,加入25μl EB(自备)或去离子水,涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中,室温静置5分钟,短暂离心,将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟),将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中,DNA文库在-20℃保存。
储存条件:-20℃
二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台) 基因结构和功能专业优质供应商:北京百奥莱博科技有限公司
关键词:Ion Torrent平台,二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台),NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent,WE0228
我公司严格遵守“质量优先、客户优先、技术优先、服务优先”“四项优先”原则;二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)已被广泛应用于化学、化工、生命科学的基础研究和开发应用等诸多领域,并销往全国各地,公司客户遍布国内各大学、医院、研究所、卫生防疫、制药公司、生物公司等单位,得到广大客户的一致好评。我们的宗旨是“为客户提供质的产品和服务”。 百奥莱博以技术为核心并拥有完善的市场营销体系、现代化管理体系和专业化物流配送系统,程度满足国内外生命科研人员的产品需求。公司专门设立优质完善的客服ZX及技术ZX,时间为客户解决技术支持、产品跟踪以及售后等相关问题,旨在生命科学和医学科学研究领域创造具有国际竞争力的自主知识产权品Pai产品。欢迎社会各界朋友前来洽谈业务,共创辉煌!
欲了解更多二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台) 基因结构和功能的品Pai、产地、价格及说明书等产品信息,请致电北京百奥莱博科技有限公司,我们将竭诚为您服务,另外,以下产品正在火爆促销:
编号 | 类别 | 名称 |
WE0344 | 一抗 | 抗V5标签多克隆抗体 |
WE0167 | DNA纯化 | GX无内毒素质粒大量提取试剂盒 |
WE0132 | 核酸扩增(PCR) | cDNA链合成试剂盒 |
WE0389 | 生物素化抗体 | 生物素化兔抗山羊IgG(H+L) |
WE0379 | 二抗 | RRX标记山羊抗小鼠IgG(H+L) |
WE0227 | 其他分子生物学试剂 | 人类cDNA |
WE0381 | 二抗 | Cy3标记山羊抗兔IgG(H+L) |
WE0273 | 蛋白质研究 | 微量BCA蛋白定量试剂盒 |
WE0335 | 一抗 | HRP标记抗His标签单克隆抗体 |
WE0369 | 二抗 | RRX标记驴抗大鼠IgG(H+L) |
WE0265 | 蛋白质研究 | 细胞核/浆蛋白抽提试剂盒 |
WE0382 | 二抗 | RRX标记山羊抗兔IgG(H+L) |
WE0172 | DNA纯化 | 新型固定组织基因组DNA提取试剂盒 |
WE0156 | 核酸扩增(PCR) | BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)(高含量ROX校正染料) |
WE0375 | HRP标记抗体 | HRP标记山羊抗人IgG(H+L) |
WE0292 | 蛋白质研究 | Western中分子量蛋白Marker |
WE0311 | 蛋白质研究 | Tris-甘*酸转膜缓冲液(pH8.3,10×) |
WE0376 | HRP标记抗体 | HRP标记山羊抗人IgM(Fc5μ) |
WE0352 | 一抗 | 抗GST标签单克隆抗体 |
WE0301 | 蛋白质研究 | X光暗盒(12.7cm×17.8cm) |
WE0263 | 蛋白质研究 | 酵母蛋白抽提试剂盒 |
WE0195 | RNA纯化 | miRNA提取试剂盒 |
WE0157 | 核酸扩增(PCR) | miRNA cDNA链合成试剂盒 |
WE0284 | 蛋白质研究 | 1.5 M Tris-HCl缓冲液(pH8.8) |
北京百莱博科技有限公司专业生产基因结构和功能产品,欢迎来电咨询选购二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台) 基因结构和功能。
温馨提示:不可用于临床ZL。