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名称:北京现货罗丹明标记鬼笔环肽厂家直销
编号:QN0267
规格:300T
英文名:TRITC Phalloidin
品Pai:百奥莱博
产地:北京
本品为TRITC标记的鬼笔环肽,染色反应特异性强,对比性高,具有比Actin抗体更好的染色效果,适合用作F-actin的定性和定量检测。另外,经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性,适用性广泛。
别名:罗丹明鬼笔环肽
分子式:C60H70N12O13S2
分子量:1231.4
性状:紫色粉末(冻干粉)
鬼笔环肽(Phalloidin)是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏的环状七肽毒素,以高亲和力(Kd= 20 nM)选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin,而不会与单体肌动蛋白G-actin结合,通常用来标记组织切片,细胞培养物或无细胞体系中的F-actin,从而对F-actin进行定性和定量分析。另外,鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维,无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞,按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略,染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此,鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白(Actin)抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小,直径约12-15Å,分子量<2000 Daltons,未标记肌动蛋白(Actin)的许多生理特性都得以维持,比如,同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白,原肌球蛋白,DNase I等仍能发生反应;鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质;以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。
鬼笔环肽(Phalloidin)的结合阻止丝状肌动蛋白(微丝)的解离,稳定微丝结构,从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度(CC)降至<1µg/mL,因此,可用作一种聚合促进剂。此外,鬼笔环肽还可YZF-actin的ATP水解活性。
1. 工作液准备
本品以溶于甲醇的 20µM 储存液形式提供,总量为 300µl。按照 100 nM 的工作液浓度来换算,可制备总量为 60ml 的工作液。建议收到产品后,根据单次使用量,对母液进行小量分装,-20℃避光冻存,一年稳定。开始实 验前,使用 1×PBS 缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为:80~200nM。现配现用。
2. 染色步骤
1) 细胞爬片生长 24h,使其密度达到 50%汇合度。
2) 吸掉培养液,37℃预热的 1×PBS(pH 7.4)清洗细胞 2 次。
3) 使用溶于 PBS 的 4%甲醛溶液进行细胞固定,室温固定 10min。 注意:避免固定剂中含有甲醇成分,因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。
4) 室温条件下,用 PBS 清洗细胞 2~3 次,每次 10min。
5) 室温条件下,用丙*(代"酮")(≤-20℃)脱水或者用 0.5% Triton X-100 溶液透化处理 5min。
6) 室温条件下,用 PBS 清洗细胞 2~3 次,每次 10min。
7) 取 200µl 配制好的 TRITC 标记鬼笔环肽工作液,覆盖住盖玻片上的细胞,室温避光孵育 30min(通常情况下, 4℃~37℃孵育皆可)。 注意:为了降低背景,可于 TRITC 标记的鬼笔环肽工作液内加入 1% BSA;另外,孵育过程中为了避免溶液挥 发,可将盖玻片转移到一个密封的容器内。
8) 用 PBS 清洗盖玻片 3 次,每次 5min。
9) 使用 200µl DAPI 溶液(浓度:100 nM)对细胞核进行复染,约 30s。
10) 用 PBS 清洗盖玻片,然后倒置在已经滴有一滴 Fluoromount-GTM 水溶性封片剂的载玻片上。使用纸巾轻轻檫 掉多余封片剂,然后用指甲油封片。此法制备的标本玻片可置于 4℃避光保存,通常 6 个月内可继续做 F-actin 染色分析。 注意:也可以直接使用含有 DAPI 的抗荧光淬灭封片剂合并步骤 9)10),简化步骤。
11) 荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察,选择 TRITC 激发/发射滤片(Ex/Em=540/570nm)和 DAPI 激 发/发射滤片(Ex/Em=364/454nm)。
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·SABC免疫组化试剂盒(兔IgG)(AP显色)
编号:QN1228
英文名称:SABC(Rabbit IgG)-AP Kit
规格:100T-200T
本试剂盒适合于一抗为兔IgG的免疫组化实验,采用AP显色。
试剂盒组成:
封闭液(5%BSA)—————————10ml
Bio-羊抗兔IgG浓缩液——————100ul
SABC-AP浓缩液—————————100ul
稀释液-————————————30ml
1×AP反应缓冲液————————30ml
25×BCIP-———————————1ml
25×NBT————————————1ml
SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。
实验步骤:(以石蜡切片为例,仅作参考)
1. 切片常规脱蜡至水(三次二甲*,三次乙醇)。
2. 可选步聚:
a、热修复抗原
b、酶消化
c、跳过此步,直接进入下一步。
3. 滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,不洗。
4. 用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃ 1小时左右或20℃时2小时左右。也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗2分钟×3次。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。具体稀释度和孵育时间参考一抗生产厂家说明书。)
5. 根据用量,用稀释液将Bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul Bio-羊抗兔IgG浓缩液混匀。此工作液4℃可保存一周).滴加Bio-羊抗兔IgG工作液,20-37℃ 30分钟。PBS(pH7.2-7.4) 洗2分钟×3次。
6.根据使用量,用稀释液将SABC-AP浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-AP浓缩液混匀。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-AP工作液,20-37℃,30分钟。PBS (pH7.2-7.4)洗5分钟×4次。
7.根据用量,1ml AP缓冲液中加入40ul NBT溶液,混匀后再加入40ul BCIP溶液。此工作液现用现配。室温显色, 镜下控制反应时间。蒸馏水洗涤终止反应。
**对于冰冻切片,固定后,PBS漂洗两次,接上述第二步。**
注意事项:
1、如果染色背景过高,在SABC反应之后,AP显色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后AP显色。
2、因为免疫组化指标众多,标本不一,此步骤仅作参考。
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我公司依托国内外技术研发人才的优势,公司的销*(代"售")额保持高速增长,企业规模不断扩大,拥有专业的技术研发团队,长期致力于ELISA试剂盒、生物试剂(包括)的研发,为客户提供引物设计与合成、免疫组化、PCR定量服务等一系列实验代测服务。
QN0166 脂多糖(LPS) Lipopolysaccharides;LPS
9029-60-1 脂肪氧化酶 Stearic Acid
QN1216 EDTA脱*液(pH7.2) EDTA decalcifying solution, pH 7.2
476-66-4 鞣花酸 Fluorescein
YM28041 Microcococcus lysodeikticus cells Tween 60
804-63-7 硫*(代"酸")奎宁 Potassium clavulanate
QN0743 鱼藤酮 Rotenone
27821-45-0 5-尿苷二磷酸二*盐 Dextran blue 2000
9001-45-0 β-葡萄糖苷酸酶 Sepharose 4FF
6409-77-4 核固红 Molecular sieves type 4A
QN0421 尿酸酶 Uricase
156-39-8 对羟基*丙*(代"酮")酸 Boc-L-Phenylalaninol
103404-75-7 D-虫荧光素* 2-Nitrobenzaldehyde
56-34-8 四乙基*化铵 Hydrindantin dihydrate
QN0074 利福平 Rifampin
12154-95-9 *甲酰基二羰基 Acerola cherry
QN1044 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 IPTG(Isopropyl β-D- Thiogalactopyranoside )
3761-53-3 丽春红2R EDTA-3K
927-20-8 α-甘油磷酸*盐 Thioflavine S
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2390-54-7 硫黄素T Cresol Red
85-86-9 苏丹Ⅲ Pyrophosphoric acid
62013-04-1 地红霉素 Luminol
QN0304 D-天门冬酰胺一水合物 D-(-)-Asparagine monohydrate
144-19-4 2,2,4-三甲基-1,3-戊二醇 Bentonite
68-41-7 D-环丝*酸 Neocuproine
531-55-5 天青Ⅰ Guanine
YM28169 聚乙*(代"烯")醇磷酸铵 β-D-Glucan from barley
1115-59-9 L-丙*酸乙酯盐*(代"酸")盐 4-Methylesculetin
58-86-6 D-木糖 L-allo-Threonine
328-42-7 草乙酸 DL-α-Glycerol phosphate magnesium salt hydrate
9028-79-9 半乳糖氧化酶 Stachyose hydrate
QN1193 *化*结晶紫增菌液
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