BTN91204型动植物膜蛋白微量制备试剂盒现货供应

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

BTN91204型动植物膜蛋白微量制备试剂盒现货供应由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多动植物膜蛋白微量制备试剂盒等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：BTN91204型动植物膜蛋白微量制备试剂盒现货供应
编号：BTN91204
规格：50次
英文名：Animal-Plant Membrane Protein Miniprep Kit
品Pai：百奥莱博
产地：北京
细胞膜蛋白质参与了很多重要的细胞活动，根据它们与膜结合的位置一般分为两种，一种是附着在细胞膜上，另一类是嵌入到细胞膜中间。附着型膜蛋白疏水性较弱，比较容易提取和纯化；而嵌入型膜蛋白疏水型很强，所以在水溶液里面很难溶解，非常难以提取和纯化。百奥莱博根据上述特点，经过精心优化的、开发出本产品，专门用于分离纯化这两种膜蛋白。

产品特点：
1. 两步法提取，先纯化含膜组分，再分离附着型膜蛋白和嵌合型膜蛋白。
2. 膜蛋白(附着型+嵌入型)产量高，对肝脏组织而言，其线粒体膜蛋白产率为10μg/mg左右，过氧化物酶体为1μg/mg左右，内质网为25-30μg/mg。
3. 所得的膜蛋白大部分具有生物活性，可用于活性研究。
4.可用动物、植物培养细胞和实体细胞为材料，也可用预先纯化的含膜组分或细胞器(如线粒体、叶绿体、内质网、过氧化物酶体)为材料(本试剂盒不含纯化细胞器的试剂)。
5. 本方法重复性好。
6. 本试剂盒足够50次微量提取，分A型和B型两种。A型用于附着型膜蛋白，B型用于嵌合型膜蛋白和附着型膜蛋白。

试剂盒组成：

 

成分	A型	B型
溶液A	100ml	100ml
溶液B	10ml	10ml
溶液C	50ml	100ml
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1. 对培养细胞：收集1×107个培养细胞(动物细胞、植物细胞)，用20mL自备的冰浴的PBS 洗涤三次，每次洗涤后需要4℃下1000 g离心2分钟，然后小心弃上清。对实体组织：由于各种动植物的各种实体组织的属性差别太大，故本手册的纯化膜组分的操作步骤(第1-7 步)不一定完全适合，用户需要自行优化以纯化含膜组分或含膜的细胞器(如细胞质膜、内质网、线粒体、叶绿体等)，再将含膜组分或细胞器沉淀直接用于第8 步的膜蛋白提取。
2. 将洗涤后的细胞沉淀重悬在2mL溶液A中，冰上静置10分钟。注意：膜蛋白有膜的保护，在纯化过程中对蛋白酶的降解没有胞浆蛋白敏感，一般可以不加蛋白酶YZ剂。但如果纯化的膜蛋白的确有降解的话，可以在溶液A中加入自备的蛋白酶YZ剂混合物。
3.转移到容积为2mL的Dounce 玻璃匀浆器上下匀浆20-50次(具体次数取决于细胞种类，293T细胞一般需要20次左右，而MEF细胞一般需要50次左右。Z好用样品先进行预实验以摸索匀浆次数，匀浆次数时在显微镜下能看见细胞破裂但细胞核完整)。
4. 将匀浆液转移到15或50mL塑料管中，加入相当于匀浆液体积1/10的溶液B，其间可以轻柔颠倒混匀3-5次，留少量样品作为对照1(匀浆液)。
5. 4℃ 2500rpm离心20分钟，沉淀为细胞核，上清为胞浆和膜成分，留少量样品作为对照2(胞浆和膜成分)。
6. 将上清液用Beckman Optima 台式超速离心机100,000 g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该为100,000g，否则有可能得不到膜成分沉淀。
7.小心转移上清(胞浆部分)并留少量样品作为对照3(胞浆)。
8. 将沉淀(含膜组分)重悬于1mL 冰浴的溶液C中后，冰上静置30分钟，留少量样品作为对照4(膜成分)。本成分电泳前，需要先用自备的TCA沉淀(TCA 终浓度为10%)，再用冰冷的丙*(代"酮")洗涤两次后再溶解在1×上样液中待用。对照1-3 号不需要这样的预处理。
9. 用Beckman Optima 台式超速离心机100,000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致，否则有可能得不到沉淀。
10. 如果需要附着型膜蛋白，则取上清(含附着型膜蛋白)弃沉淀(含膜和其中的嵌合型膜蛋白)。上清可以放-20℃长期保存，如果需要电泳，需要先用自备的TCA沉淀(TCA 终浓度为10%)，再用冰冷的丙*(代"酮")洗涤两次后再溶解在1×上样液中与对照1-4 号一起上样电泳。
11. 如果需要嵌合型膜蛋白，则取出上清(含附着型膜蛋白)并留少量样品作为附着型膜蛋白样品，然后再用1mL 冰浴的溶液C重悬沉淀，然后100,000g 4℃离心60分钟，去掉上清(上清含残留的附着型膜蛋白，可以留样作为洗涤后的附着型膜蛋白样品)。沉淀含膜和其中的嵌合型膜蛋白。如果需要测定膜蛋白的浓度，则将其溶解在自备的0.5 M NaOH溶液。

更多有关BTN91204型动植物膜蛋白微量制备试剂盒现货供应的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·一步式复杂样品DNA提取试剂盒
编号：BTN61202
英文名称：One-step DNA extraction kit
规格：10mL
本试剂盒是专用于从各种常见的样品中快速提取用于PCR扩增的DNA。

试剂盒特点：
1.操作简单，只用一步(约5-10分钟)即可以得到用于PCR扩增的DNA 模板，不需要任何离心、抽提等操作步骤，比常用的Chelex100提取方法和*酚/*仿方法快。
2.兼容性广，可以用于几乎所有的分子生物学样品，包括细菌、昆虫、真菌、各种植物、各种动物、法医样品(包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛发、组织样品、口腔细胞和FTA卡)、石蜡组织切片等。
3.环保健康，不使用任何有毒有害的试剂。
4.尤其适用于大规模育种筛选和临床筛选。

试剂盒组成：

成分	规格
一步式广谱DNA提取试剂	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将约2μl液体样品(如全血、细胞培养液)或2mg的固体样品(如动物组织，约半粒芝麻大小)加入到50μl 本产品中。
注意：样品加入量可能需要根据其DNA的含量稍做调节，如果样品DNA含量少，则用量要增加，但总液体样品用量Z好不要超过本产品用量的1/10；固体样品用量Z好不要超过1mg/10μl的比例。下面是部分常见生物样品的DNA含量：

材料	DNA含量
精液	150-300μg/mL
血液	20-40μg/mL
精斑	20-30μg/cm2
唾液	1-10μg/mL
血斑	250-500 ng/cm2
口腔拭子	100-1500 ng/拭子
组织	50-500 ng/mg
阴道拭子	10-3000 ng/拭子
骨头	3-10 ng/mg
拔出的带发根头发	1-750 ng/发根
尿液	1-20 ng/mL
自然脱落的带发根头发	1-10 ng/发根

2. 80℃加热5分钟后。
注意：此步的条件可以根据样品的质地稍做调节。如果是液体样品，室温处理1-3分钟即可。如果是难以破裂的细胞和材料(如酵母、石蜡组织切片、血斑)，则保温时间可以延长到10-30分钟。
3. 简短振荡混匀后取裂解物直接进行PCR(裂解物体积Z好不要超过PCR 体积的1/10)。
4.其余同常规操作。

疑难解答：
Q： 本产品与美国BioVenture的GeneReleaser 有何区别？
A： 本产品处理简单，只需要80℃加热5分钟即可；而GeneReleaser 加热处理复杂而繁琐，共需要9 步处理，累计时间需要10 余分钟量(具体是65℃ 30s，8℃ 30s，65℃ 90s，97℃ 180s，8℃ 60s，65℃ 180s，97℃ 60s，65℃ 60s，80℃放置)，手工操作时十分难以控制。
Q： 用本产品提取的DNA 能否用电泳方法检测？
A： 由于DNA含量太少，不能用电泳方法检测。



BTN91204型动植物膜蛋白微量制备试剂盒现货供应关键词：动植物膜蛋白微量制备试剂盒,Animal-Plant Membrane Protein Miniprep Kit,BTN91204


·柱式真菌RNA大量提取试剂盒
编号：BTN80904
英文名称：Fungal RNA Column large-scale extraction kit
规格：5次
本试剂盒是在本公司柱式真菌RNA提取试剂盒(BTN80804)的大提升级产品，跟柱式真菌RNA提取试剂盒相比，它具有下列特点：
1.样品处理量大，Z多可以处理50mL液体培养物或2g菌丝体。
2. 操作简单快捷，整个过程只需要约30分钟。
3. RNA 纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Norther杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
4. RNA产量高，一般在20-70μg/mL 酵母培养物(约2.0 ×107个细胞)。
5. 非酶细胞破裂法，适用于各种形态的真菌和各个种属的真菌，包括Candida albican、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pombe和Pichia pastoris等。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	100ml
溶液D	30ml
大提离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将50mL液体真菌培养物在塑料离心管中5000-7,000rpm 4℃离心1分钟，并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。如果是菌丝体，则直接称取2 克放入50mL塑料离心管中。
2. 加入10mL溶液A并充分吹打混匀。注意：溶液A存放时容易产生沉淀，如果有沉淀，用前请置于65℃融化并充分摇晃均匀。
3. 加入10mL溶液B，剧烈振荡30秒。
4. 65℃保温5分钟。
5. 5000-7,000rpm 4℃离心3～5分钟，转移上清到一自备的、干净的50mL塑料离心管中。
6.在上清液中加入2mL自备的*仿，充分振荡30秒混匀。
7. 4℃ 5000-7,000rpm离心3～5分钟，转移上清液到一自备的、干净的50mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清液(体积越10mL左右)3倍体积的溶液C和1倍体积的溶液D，充分混匀。
9. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次转移后需要室温放置2-3分钟以让RNA跟吸附膜充分结合，然后5000-7,000rpm室温离心30-60秒，弃收集管中的穿透液，然后再加入后一批混合液，重复操作，直到混合液全部挂柱。
10. 次洗涤：将10mL 通用洗柱液加到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 第二次洗涤：一次洗涤一般足够去除杂质，但如果样品OD260/280 比值不高，可以再用10mL 通用洗柱液重复上步洗涤一次。
12.室温离心空柱子(带收集管)半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 50mL塑料离心管中，加入1mL RNA 洗脱液。
14.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测：
 注意：普通DNA上样液不含变性剂，更没经过去RNase处理，所以Z好不要用于RNA电泳。
16. RNA产量和纯度产率测定：
 将5-10μL RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA 稀释在DEPC 水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%；也不要稀释过度，使OD读数在仪器的有效范围之外，这样得到的OD 比值没有意义。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA 吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议Z好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液RNAload可以使RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，Z好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用5分钟柱式DNA 清除剂、非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。


BTN91204型动植物膜蛋白微量制备试剂盒现货供应关键词：动植物膜蛋白微量制备试剂盒,Animal-Plant Membrane Protein Miniprep Kit,BTN91204


·6nt随机引物(0.5 ug/uL)
编号：BTN100409
英文名称：Hexamer
规格：5μg
本产品为长度为6nt的随机引物，序列为5´-(NNNNNN)-3´，主要用于以任何RNA为模板合成cDNA，也可以用于DNA探针的随机引物标计。

储存条件：低温运输和-20℃保存，有效期一年。

疑难解答：
Q：在合成cDNA时，使用Oligo dT12-18和用随机引物有何区别？
A：只有当以带polyA尾巴的RNA作为模板才能使用Oligo dT作为引物，而任何RNA模板都可以使用随机引物。使用后者的序列覆盖率比使用Oligo dT更高。

·LB培养基
编号：BTN100602
英文名称：Lysogeny Broth Medium，Powder
规格：250g
LB培养基是由美国科学家Giuseppe Bertani在1951年独立开发。但现在常用的LB配方是由Miller修改而成，主要是去掉Glucose并把NaCl浓度从0.5 g/L增加到10 g/L。本产品就是根据Miller配方制备的干粉型培养基。

储存条件：常温运输及保存，有效期两年。

使用方法：称取本产品25.0 g于1 L蒸馏水或去离子水中，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟，备用。

·柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒
编号：BTN60807
英文名称：Endotoxin-free plasmid DNA column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是整合我们公司柱式质粒DNA提取和菌体内毒素清除剂两产品而成。菌体内毒素清除剂是我们公司推出的产品，在质粒提取前就把细胞壁上的内毒素清除掉，彻底避免了目前通用的先提取DNA+内毒素混合物，再从中纯化质粒DNA的弊端。用本产品提取的质粒DNA，内毒素的污染浓度低，适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。

试剂盒特点：
1. 操作简单，只在经典的柱式质粒DNA提取前，增加菌体内毒素清除一步。
2. 去内毒素效果好，处理一次可以去除99%以上的内毒素。
3.质粒丢失少，产率只比柱式质粒DNA提取低5-10%，效果好于先提质粒DNA，再用液相内毒素清除剂处理的方法。
4. DNA可以直接用于转染等实验。

试剂盒组成：

成分	规格
菌体内毒素清除剂	200ml
溶液A	13ml
溶液B	13ml
RNase A(10mg/mL)	150μl
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。RNase A(10mg/mL)需要低温运输和保存。

使用方法：

一: 用菌体内毒素清除剂清除E.coli细胞壁上的内毒素。
1. 收集1.5-3mL E.coli饱和菌液，12000rpm离心1分钟，弃上清，得到细菌沉淀。
2. 加入1mL本产品温和混匀后10,000-12000rpm离心1分钟，弃上清(含内毒素)。
3. 再重复上述操作3-4次，得到的菌体可以直接进入后续的质粒DNA提取步骤。
二：从无内毒素的E.coli中提取质粒DNA
1. 用1.5mL离心管收集1-4mL 过夜培养饱和菌液，12000rpm离心1分钟，弃上清，再短暂离心，吸弃残留液体。
2. 加入250μl溶液A，用枪头充分吹打使菌体重悬。
3. 加入250μl溶液B(如果有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用)，温和反复颠倒混匀4-6次，看到溶液变粘即可。千万不要剧烈振荡。
4. 加入350μl溶液C，反复颠倒混匀4-6次，可见白色沉淀物产生，然后冰上静止2-5分钟。注意：不要超过5分钟。
5.室温12000rpm离心10分钟，将上清液转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
6. 12000rpm离心1分钟，质粒DNA吸附到膜上，弃收集管中的废液。
7. 加入500μl的通用洗柱液，12000rpm离心1分钟，弃收集管中的废液。注意：我们公司的通用洗柱液是由乙醇和含NaCl的溶液组成，NaCl在其中的溶解度较低，放置一段时间后可能会产生NaCl沉淀。如果有沉淀，用前Z好加热使之溶解并混匀后使用。
8. 重复上步操作1次。
9. 12000rpm离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响后续的电泳上样(DNA沉不到加样孔里去)和酶反应。
10. 将离心柱置于新的1.5mL离心管(自备)中，加入50μl DNA洗脱液2.0，室温放置2分钟。
11. 12000rpm离心1分钟，离心管底溶液即质粒DNA。
12. 由于天我们公司的吸附柱结合DNA能力较强，需要再加入50μl DNA洗脱液2.0到离心吸附柱中，室温放置2分钟，重复上步操作，往往还能洗脱下很多质粒DNA(相当于次洗脱的20-30%)。注意不要使用上步得到的含有DNA的洗脱液来进行第二次洗脱。
13. 将两次洗脱收集到的质粒DNA汇集即可立即使用或放冰箱保存。

我公司正在打折促销蛋白质研究全系列产品，恭候您的咨询选购BTN91204型动植物膜蛋白微量制备试剂盒现货供应。