北京现货非酶DNA清除剂(＞200nt)销售

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货非酶DNA清除剂(＞200nt)销*(代"售")，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货非酶DNA清除剂(＞200nt)销*(代"售")
编号：BTN60201
规格：1.5mL
英文名：Non-enzymatic DNA Scavenger
品Pai：百奥莱博
产地：北京
用Trizol等方法提取的总RNA样品中经常会含有基因组DNA污染，这些污染会影响下游的RT-PCR和Northern杂交等实验。目前Z常用的RNase-free DNase处理方法因DNase中所含残留的RNase能破坏RNA完整性而具有很大缺陷。非酶法DNA清除剂不但彻底避免了RNase-free DNase的这一缺陷，同时还具有操作快速，稳定性好和性价比高等诸多优点，完全可以替代价格昂贵的RNase-free DNase。

产品特点：
1.GX，能使总RNA中的基因组DNA污染降上百倍(根据PCR检测)而RNA分子完整性不会受到任何影响。
2. 不含RNase污染，因为本产品为非酶产品，所用溶液又经过液相RNase清除剂的处理(能不可逆地灭活RNase)；而在制备RNase-free DNase时，为避免DNase失活，处理条件往往比较温和，所以终产品中往往残留有RNase污染。
3.快速，全部操作在样品管中完成，只需要十多分钟，不需要37℃保温和酚/*仿抽提；而使用RNase-free DNase时，需要上述处理，增加了污染RNase的可能性。
4. 稳定，本产品为非酶产品，可以常温运输和4℃长期保存；而RNase-free DNase的运输和长期保存必须在低温进行。
5. 性价比高，单位成本远低于RNase-free DNase。
6. 只能回收长度在200nt以上的RNA(DNA Scavenger-2可以回收长度在200nt以上和以下的RNA)。

储存条件：常温运输、4℃保存,有效期一年。

使用方法：
1. 将总RNA溶液与DNA Scavenger按3：1的比例混合(即300μl RNA溶液需加100μL DNA Scavenger)。
2. 12000～15000g室温离心10分钟后小心弃上清，
3.在沉淀中加入1mL自备70%乙醇，震荡半分钟。
4. 12000～15000g室温离心5分钟后小心弃上清。
5. 将离心管短暂快速离心，小心吸弃余液。
6. 加入适量RNase-free水或液相RNase清除剂溶解RNA沉淀，立即使用或放-80℃长期保存。
注意:本产品只能回收长度在200nt以上的RNA，RNA样品中含有小RNA，将会丢失。对如果要去除小RNA样品中的DNA污染，建议使用我公司的DNA Scavenger-2(BTN70801)

北京现货非酶DNA清除剂(＞200nt)销*(代"售")极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·酪蛋白溶液(PBS)
编号：BTN131105B
英文名称：Casein Blocking Solution(PBS)
规格：250mL
即用型酪蛋白(1%)用于封闭非特异性位点。
A型：溶于TBS的Hammarsten级酪蛋白，Kathon防腐剂，pH7.4。
B型：溶于PBS的Hammarsten级酪蛋白，Kathon防腐剂，pH7.4。可用于在使用牛奶封闭背景高时作为替代品使用。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·限制性内切酶SphI
编号：BTN17-0260
英文名称：Sph I Restriction Endonuclease
规格：500U
Sph I限制性内切酶识别位点：
5´...G　C A T G↓C...3´
3´...C↑G T A C　G...5´

产品组成：

 

成分	规格
SphI，10U/μL	50μL
Buffer A，10×	1mL
Buffer B，10×	1mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

贮存Buffer：10mM potassiu*(代"m")-phosphate(pH7.0＠25℃)，50mM KCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，0.15% Triton X-100，0.5mg/mL BSA and 50% glycerol。
1×Buffer A：10mM Tris-HCl(pH7.5)，10mM MgCl2，0.1mg/mL BSA。
1×Buffer B：33mM Tris-acetate(pH7.9 at 37℃)，10mM magnesium acetate，66mM potassiu*(代"m") acetate，0.1mg/ml BSA。

活性定义：一个活性单位是指50μl反应体系中，37℃条件下，1小时内将1μg的lambda DNA完全分解所需的酶量。

热灭活：65℃下孵育20分钟可灭活。

使用方法：
1．单酶切DNA：
①在离心管中加入下列溶液：

成分	用量
Sph I	0.5-2μL
10×Buffer A	2μL
DNA(0.5-1μg/μL)	1μL
nuclease-free water	16L

②轻柔混匀，短暂离心。
③37℃孵育1-16小时。
2．双酶切或多酶切DNA：
需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液(一般Buffer B可作为双酶切Buffer)，然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择，可以在一种酶消化完毕后进行纯化，纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。
3．直接酶切PCR产品：
①在离心管中加入下列溶液：

成分	用量
PCR reaction mixture	10μL(~0.1-0.5μg of DNA)
nuclease-free water	18μL
10×Buffer A	2μL
Sph I	1-2μL

②轻柔混匀，短暂离心。
③37℃孵育1-16小时。


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·*酚蓝溶液(电泳级)
编号：BTN100882
英文名称：Bromophenol Blue Solution
规格：10mL
*酚蓝分子式为C19H10Br4O5S，分子量为669.97，CAS号为115-39-9。易溶于*氧化*溶液，溶于甲醇、乙醇和*酚，是一种pH指示剂，在pH3.0(黄)~4.6(蓝紫)范围，颜色由黄变蓝。本产是*酚蓝的1%水溶液，用作制备常用做电泳指示染料，其泳动率在0.5-1.4%琼脂糖中，相当于300bp dsDNA，在8% PAGE变性胶中相当于20bp dsDNA。如果含*酚蓝的上样液跟样品混合后变黄，则表示样品中酸性物质没去除干净，必须用1M Tris pH8.8调到*酚蓝呈蓝色，否则蛋白将向相反方向移动。

储存条件：常温运输及避光干燥保存，有效期一年。

·端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)
编号：BTN111009
英文名称：Telomeric Repeat Amplification Protocol Kit
规格：50次
本品是我司在经典TRAP技术基础上改良而得，专门用于快速测定人类细胞端粒酶的相对活性(需要跟对照样品比较)。端粒酶存在于85-90%的肿瘤组织中，因此通过检测端粒酶活性就能早期诊断大多数肿瘤。目前Z常用的检测端粒酶活性的方法就是TRAP，它利用端粒酶能在外加的TS模板DNA的末端添加不同数量的TTAGGG序列这一特点，通过PCR检测延伸产物而GX检测端粒酶活性。原理如下：


产品特点：
1．一站式，提供从细胞裂解到PCR的所有试剂，但不含PAGE和银染试剂。
2．一管式操作，端粒酶延伸和PCR在同一体系中完成，方便快捷。
3．提供改良的、长为150bp的内参和含8个端粒序列的合成端粒，可有效排除PCR假阴性。内参长度远大于TRAP产物，不会干扰结果分析。
4．改良的TS模板和PCR引物，极大降低了引物二聚体的形成。
5．既可用于培养细胞，也可用于实体组织。
6．灵敏度高，可以检测到10个肿瘤细胞中的端粒酶活性。

试剂盒组成：

成分	规格
TRAP细胞裂解液	10mL
PCR Mix 3.0	1.5mL
合成端粒(PC)	50μL
TS-引物混合物(含内参)	300μL
超纯水	1mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、端粒酶的提取
注意：端粒酶是蛋白质和RNA组成的复合体，RNA极容易被降解，因此，提取端粒酶应该跟提取RNA一样，尽量在低温条件下快速操作，并且必须使用RNase-free的耗材，桌面Z好用固相RNase清除剂清洁(BTN3090)清洁。
1．对冷冻的实体组织：将50-100mg冷冻组织在液氮中用预冷的研磨器研磨成粉末，再转移到预冷的玻璃匀浆器中，加入200μl预冷的TRAP细胞裂解液，温和手动匀浆数次后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次，然后直接进入第3步操作。为保证裂解效果，可在显微镜下观察。如果组织样品不足50-100mg，可以按比例降低TRAP细胞裂解液的用量。
2．对新鲜的培养细胞和组织：用自备的预冷PBS洗涤105-106个经过胰酶处理的细胞或50-100mg新鲜组织，3000g 4℃离心5分钟，弃上清；加入200μL预冷的TRAP细胞裂解液悬浮细胞或组织。对细胞：涡旋振荡10秒后置冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。对组织：在冰上用玻璃匀浆器轻柔匀浆后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。如果细胞不足1×106或50-100mg，可按比例降低TRAP裂解液的用量。
3．12000-14000g 4℃离心20分钟。
4．收集160μL上清，先取部分用于测定蛋白质浓度，可通过测定215nm和225nm的光吸收得到，计算公式是蛋白质浓度(μg/μL)=0.144×(A215-A225)×稀释倍数，也可使用BCA法测定蛋白浓度。本试剂盒制备的细胞裂解物的蛋白浓度一般在10-750 ng/μL。知道各样品的蛋白浓度后，可用TRAP细胞裂解液将各样品的蛋白浓度调成一样便于比较，然后按10μL/管分装得到至少15管裂解物，放-80℃冷冻保存(可存放一年)。每个样品可取一管进行热灭活(95℃处理10分钟)后再放-80℃冷冻保存，此管将作为该样品的阴性对照。

二、TRAP反应
5．确定每个TRAP反应的细胞裂解物用量：为便于分析比较，每个TRAP反应所用的蛋白量(或细胞数)必须一样。由于细胞裂解物中一般都有高浓度的不明Taq DNA聚合酶YZ物(TRAP失败Z常见的原因)，因此结果往往是用稀释10-1000倍后的细胞裂解物得到。建议用一个样品稀释不同浓度做TRAP预实验。
6．在PCR管中按下表设置TRAP反应(50μL反应体系，以A和B两个样品为例)：

成份	A样品管	A阴性 对照管	B样品管	B阴性 对照管	实验 阴性对照	实验 阳性对照
A样品	2μl	-	-	-	-	-
A阴性对照	-	2μl	-	-	-	-
B样品	-	-	2μl	-	-	-
B阴性对照	-	-	-	2μl	-	-
TRAP细胞裂解液	-	-	-	-	2μl	-
合成端粒	-	-	-	-	-	2μl
TS引物混合物	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl
PCR Mix	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl
超纯水	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl

 注：为避免污染，Z好等其他样品加完并盖上盖后再加合成端粒。
7．吹打混匀后进行PCR扩增，扩增条件(仅供参考，用户可优化)如下：

步骤	温度	时间
端粒酶延伸	30℃	30min
端粒酶灭活	95℃	5min
PCR(循环35次)	94℃	30s
	55℃	60s
	72℃	30s

三、PAGE-银染检测及结果解读(本试剂盒不含PAGE-银染检测试剂盒)
8．取5μL PCR反应液进行10%非变性PAGE电泳-银染显色实验(需另购本公司PAGE电泳套装和银染试剂盒)。如果背景高(主要是由反应体系中的蛋白成分引起)，可以先进行PCR产物纯化再进行PAGE电泳和银染。
9．跟预期结果(见下表)比较。如果结果跟下表不一致，则需要按具体情况分析原因。

现象	样品管结果	样品阴性 对照结果	实验阴性 对照结果	实验阳性 对照结果
典型TRAP条带 (条带数不限)	有则有端粒酶活性 无则无端粒酶活性	不出现	不出现	不出现
阳性对照的TRAP 条带(仅8条带)	不出现	不出现	不出现	出现
150bp内参	可出现可不出现	出现	出现	出现

 注：本试剂盒所用引物产生的典型TRAP条带Z小条带为59bp。

疑难解答：
1．如果样品管有内参带，但没有TRAP条带，可能是端粒酶活性低或者失活。制备细胞裂解物时可在TRAP细胞裂解液中加入1/100体积的RNaseYZ剂以YZRNase活性，并在端粒延伸反应后增加DNA纯化一步，纯化后的DNA再用于PCR。此两步法TRAP需要用户自备DNA纯化试剂和dNTP。
2．如果样品对照管(端粒酶已经灭活)出现TRAP条带，可能是TRAP产物污染，需要使用洁净的PCR管和PCR试管架。样品制备、PCR设置和电泳需在不同房间进行。也可能是端粒酶没有彻底灭活，建议用RNase酶解法或酶解+热灭活法。
3．实验阴性对照管的实验结果中出现TRAP条带，可能是引物二聚体，可采取两步法TRAP，并且将DNA模板加入到70℃预热的PCR Mix3.0中再进行PCR。
4．实验结果不好时，可以直接采取2步法，先做端粒酶延伸和灭活，然后再纯化DNA，用纯化的DNA做PCR。此法需要用户自备dNTP。


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