柱式酵母DNA提取试剂盒(玻璃珠法) DNA纯化

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")柱式酵母DNA提取试剂盒(玻璃珠法) DNA纯化，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：柱式酵母DNA提取试剂盒(玻璃珠法) DNA纯化
编号：BTN130992
规格：50次
英文名：Yeast DNA Column extraction kit(Glass bead method)
品Pai：百奥莱博
产地：北京
酵母DNA提取是一个难题，因为酵母有很厚的细胞壁，比较难以破碎。本产品是液氮研磨法柱式酵母DNA提取试剂盒的姊妹产品，它利用玻璃珠法破碎细胞，主要用于从酵母细胞中提取DNA(液氮研磨法柱式酵母DNA提取试剂盒采用液氮研磨法破碎细胞，适用于从酵母菌丝体中提取其基因组DNA)。

产品特点：
1. 即开即用，提供包括玻璃珠、离心吸附柱在内的所有试剂和耗材。
2. 采用玻璃珠法破碎细胞，属于物理方法，远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好，也不容易带入外援酵母DNA(注：文献报道蜗牛酶或破壁酶中常常有外源酵母DNA污染，用于提取酵母DNA往往会造成污染。这些文献可从本公司本产品介绍网页下方下载)。
3. 本方法提取一个样品只需要10余分钟，方便、快速和GX。
4.一次可以处理5mL的过夜酵母培养物，所得的基因组DNA OD260/OD280一般都在1.8左右，长度一般在20 kb左右，每mL菌液的DNA产率一般在1-3ug。可以直接用于PCR和酶切等后续试验。

试剂盒组成：

 

成分	规格
酸洗玻璃珠，400 um	25g
溶液A	25mL
溶液B	25mL
溶液C	75mL
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50mL
DNA洗脱液	10mL
使用手册	1份

储存条件：常温运输及保存，保存期为一年。

使用方法：
1. 对菌液：取3-5mL过夜培养的酵母菌液(OD600一般在1以上)到干净的塑料离心管中，12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
2. 对菌落：用接种针在在培养基上刮取尽可能多的酵母菌落，转移到装有1mL水的干净的塑料离心管中，洗涤下接种环上的菌体。12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
3. 对孢子材料，一般取0.1g左右，直接加入到离心管中，然后进入下一步操作。
4.在材料中加入无菌水1mL，振荡半分钟后12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
5.沉淀中加入500μL溶液A和0.5克的玻璃珠，涡旋震荡10分钟。
6. 加入500μL的溶液B，涡旋震荡，12000rpm离心2分钟，将上清液全部转移到一个5mL的干净的塑料离心管中。或者每管0.3mL，分别转移到2-3个1.5mL的干净的塑料离心管中。
7.在上清中加入3倍体积的溶液C，颠倒数次混匀后，分三次上离心吸附柱，每次上柱后均先室温放置2分钟，然后12000rpm离心1分钟，倒掉穿透液，再第二次上柱，重复上面的操作，直到挂柱步骤完成。
8.在离心吸附柱中加入500μL通用洗柱液，12000rpm离心1分钟，倒掉穿透液。
9. 重复上步操作一次。
10. 12000rpm空柱离心1分钟。
11. 加入50-100μL DNA洗脱液，室温放置1分钟以上，12000rpm离心1分钟，穿透液即为酵母DNA样品。
12. 为了得到更多的DNA样品，可以重复上步操作1-2次。
13. 所得DNA即可立即使用或放冰箱长期保存。


更多有关柱式酵母DNA提取试剂盒(玻璃珠法) DNA纯化的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：
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·非酶多糖清除剂(DNA专用)
编号：BTN111008
英文名称：Non-enzymatic polysaccharide scavengers
规格：50次
用很多方法提取的植物、真菌或细菌基因组DNA样品中经常会含有多糖(Polysaccharide)污染，这些污染会严重影响下游的酶切和PCR等实验。为此北京我公司开发了非酶法多糖清除剂(DNA专用)

产品特点：
1.GX，能有效地去除基因组DNA中的多糖污染,使DNA溶液不再粘稠。
2. DNA分子完整性不会受到任何影响。
3.快速，全部操作在样品管中完成，只需要二十多分钟。
4. 稳定，本产品为非酶产品，可以常温运输和保存。

产品组成：

成分	规格
溶液A	2.5ml
溶液B	5ml
微量核酸沉淀剂	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
1. 如果DNA溶液的体积不够100μL，用水或TE补到100μL。如果超过100μL，可以用我公司的核酸浓缩液(需另买)浓缩到100μL，或者分成几个100μL再处理。
2. 将50μL溶液A加入到100μL待处理的DNA样品中，充分吹打混匀。
3. 15μL的溶液B，充分吹打混匀。如果溶液B过于粘稠，可以先在65℃保温后再取用。
4. 加入150μL的*仿，充分振荡半分钟。
5. 12000～15000g离心2分钟，小心转移上清到一新的1.5mL塑料离心管中，交界处将有白膜样的多糖沉淀。
6. 重复上步操作，白膜样的多糖沉淀将减少。是否需要继续此步操作根据多糖污染严重程度决定。可以一直重复直到白膜不再出现。本产品提供的溶液B的量足够抽提5-6次。
7.在得到的上清液中加入两倍体积(200μL)的微量核酸沉淀剂，混匀后12000～15000g离心10-20分钟，小心弃上清。注意不要触及DNA沉淀。
8. 加入1mL自备的75%乙醇，振荡器上短暂振荡数秒后12000～15000g离心2分钟，小心弃上清。注意不要触及DNA沉淀。
9. 短暂离心数秒，用移液枪小心吸去残留液体(约50μL)后，加入适量自备TE，立即电泳检测，OD检测后放-80℃长期保存。


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·噻孢霉素溶液
编号：BTN120684
英文名称：Cefotaxime Solution
规格：1mL
本产品为浓度100mg/mL的噻孢霉素水溶液。参考浓度50mg/mL。噻孢霉素(头孢噻肟*)分子式为：C16H16N5NaO7S2，分子量：477.45，CAS号：64485-93-4。效价：916-964μg/mg，溶于水。噻孢霉素为β-半乳糖苷酶YZ型KJ素，能YZ肽聚糖的交联，从而YZ细菌细胞壁合成，常用于植物组织培养中YZ农杆菌。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期6个月。

·随机引物法DNA探针地高*(代"辛")标记试剂盒
编号：BTN90603C
英文名称：Random Primer DNA Labeling Kit(Digoxin)
规格：5次
本试剂盒是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒，标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成，可用下面的示意图表示：

本产品对Feinberg和Vogelstein经典方法进行了改良。

产品特点：
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分，简化了反应加样步骤，提高了标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已标记DNA探针不会被酶降解。
3.快速，Z快1小时即可完成标记反应。
4. 得到的DNA探针比活性高(如果是同位素，可以达到109cpm/μg DNA)，检测灵敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可)，DNA可以是各种形状(线状和环状)的、也可以是单链或双链的，长度在100bp以上均可。
6. 得到的探针长度在200-400nt之间，可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 提供三种标记选择，其中BTN90603A可用于各种同位素标记和其他任何非同位素标记，但需自备标记底物；BTN90603B和BTN90603C可分别用于生物素和地高*(代"辛")标记，不需自备标记底物。

试剂盒组成：

成分	规格
2×A型标记反应液(自备标记物型)	50μl(仅A型有)
2×B型标记反应液(生物素型)	50μl(仅B型有)
2×C型标记反应液(DIG型)	50μl(仅C型有)
dATP,2mM	10μL(仅A型有)
dTTP,2mM	10μL(仅A型有)
dGTP,2mM	10μL(仅A型有)
dCTP,2mM	10μL(仅A型有)
Klenow exo-聚合酶(2U/μL)	5μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分：

成分	用量
模板DNA	50-150ng
2×标记反应液(ABC三种之一)	10μl
超纯水	补水到15μl

注意：非同位素标记物由于疏水性强，容易与常用的塑料离心管表面非特异性结合，所以一定要使用硅化的塑料离心管。模板DNA并非越多越好，因为模板会在杂交反应中跟标记的探针杂交，竞争性地YZ探针跟靶分子的杂交。
2. 沸水浴5-10分钟，或在PCR仪上100℃加热5-10分钟使DNA模版充分变性，立即放冰上待用。注意：如果PCR仪器不能设置到100℃，99℃加热5分钟也可。
3.高速离心数秒使所有液体集中在管底，根据试剂盒类型加入下列成份：

试剂盒类型	成分及用量
BTN90603A型	dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL，浓度均为2mM) 自备的2mM dTTP/标记dUTP混合物(见注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶
BTN90603B型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水
BTN90603C型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水

注：上表中的dTTP/标记dUTP混合物中dTTP和标记的dUTP的总浓度为2mM(在20μL体系中混合液的终浓度为0.1mM，dTTP与生物素或DIG标记的dUTP的比例Z好为65:35)。由于空间阻碍，并非标记生物素或DIG标记的dUTP越多灵敏度越高，一般dTTP与标记dUTP的比例在65：35为。但如果使用自备的其他标记核苷酸，如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl标记的dUTP，则用户需要自己摸索其与dTTP之间的比例，如果使用32P标记的dUTP，则比活Z好为3000Ci/mmol，浓度为好为10uCi/μL，并且不需要加入dTTP。
4. 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
5. 37℃保温1-20小时。标记效率跟模版量和保温时间相关，具体见下表：

模版DNA用量	1小时后探针合成量	20小时后探针合成量
10ng	80ng	900ng
30ng	150ng	1.35μg
100ng	350ng	1.65μg
300ng	750ng	2.2μg
1μg	1.3μg	2.6μg
3μg	1.6μng	2.6μg

6. 加1μl自备的0.5M EDTA(pH8.0)终止反应，立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加热100℃ 5分钟使DNA探针变性成单链，然后直接加入到杂交反应液中即可。如果电泳检测，标记产物将是弥散状态。
 注意：本方法标记核苷酸掺入率极高，因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化，注意不要用酚抽提法纯化非同位素(生物素、DIG和其他等)标记的DNA探针，因为这些标记分子疏水性强，能使标记的DNA进入疏水的有机相而丢失，但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另购非同位素探针柱式纯化试剂盒)。对比活高的同位素探针，由于其极其不稳定，因此应该立即使用，不要长久放置。

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