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北京百奥莱博供应的北京WE0265型细胞核/浆蛋白抽提试剂盒厂家价格用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多细胞核/浆蛋白抽提试剂盒等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:细胞核/浆蛋白抽提试剂盒
品Pai:百奥莱博
规格:50次
产地:国产|进口
英文名:Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit
本试剂盒能够简单、快速的提取来源于哺乳动物细胞及组织的细胞核和细胞浆蛋白,所提取蛋白保持生物学活性。本试剂盒首先通过细胞浆蛋白抽提试剂裂解细胞膜,释放细胞浆蛋白,然后通过离心得到细胞核沉淀。通过细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。抽提获得的核蛋白及浆蛋白纯度高,有效避免核/浆蛋白的交叉污染,可以用于Western、Gel Shift、报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
试剂盒组成:
组份 | 50次 | |
Buffer A | 50ml |
Buffer B | 3ml |
Buffer C | 25ml |
Protease Inhibitor Cocktail | 750μl |
保存条件:Protease Inhibitor Cocktail:-20℃,其它组分:2~8℃
注意事项:
1、如需提取磷酸化蛋白请在抽提试剂中加入磷酸酶YZ剂。
2、所有样品操作请置于冰上进行。
3、可根据具体实验情况调整试剂用量,保证各试剂使用比例为Buffer A:Buffer B:Buffer C=100:5.5:50。
4、可以采用更高的速度来离心。
使用方法:
一、细胞中胞浆、胞核蛋白的提取1、请在蛋白抽提前取出抽提试剂Buffer A和Buffer C进行预冷
2、收集细胞,计数。离心去上清。
3、1×107细胞中加入1ml Buffer A(按照1:99比例在蛋白抽提前2-3分钟内加入Protease Inhibitor Cocktail),涡旋5秒以充分混匀,冰上孵育20分钟。
注意:各种细胞的特性不同,需要根据不同细胞的特性调整Buffer A的用量,如果蛋白浓度小,按比例减少Buffer A及后续Buffer B、Buffer C的用量。
4、加入55μl Buffer B,涡旋5秒以充分混匀,冰上孵育 1分钟。
5、4℃ 12000rpm(~~13400×g)离心 15分钟,收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中,-20℃保存(此提取液为胞浆蛋白)。
6、向上步所得的沉淀中加入500μl Buffer C(使用前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail),涡旋5秒以充分混匀,重悬沉淀,冰上孵育40分钟,每隔10分钟涡旋混匀一次,每次约15-30秒。
7、4℃ 12000rpm离心15分钟,收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中,-20℃保存(此提取液为胞核蛋白)。
二、组织中胞浆、胞核蛋白的提取1、取材,保存组织。
2、在蛋白抽提前取出抽提试剂Buffer A和Buffer C进行预冷。
3、称组织重量,每100 mg组织中加入1ml Buffer A(按照1:99比例在蛋白抽提前2-3分钟内加入Protease Inhibitor Cocktail),用匀浆器在冰上充分匀浆,放置在冰上孵育20分钟。
注意:各种组织的特性不同,需要根据不同组织调整Buffer A的用量,如果蛋白浓度小,按比例减少Buffer A及后续Buffer B、Buffer C的用量。
4、加入55μl Buffer B,涡旋5秒以充分混匀,放置在冰上孵育 1分钟。
5、4℃ 12000rpm离心 15分钟,收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中,-20℃保存(此提取液为胞浆蛋白)。
6、向上步所得的沉淀中加入500μl Buffer C(使用前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail),涡旋5秒以充分混匀,重悬沉淀,冰上孵育40分钟,每隔10分钟涡旋混匀一次,每次约15-30秒。
7、4℃ 12000rpm离心15分钟,收集上清(尽量收集干净上清液)至新的离心管中,-20℃保存(此提取液为胞核蛋白)。
储存条件:-20℃
关键词:细胞核/浆蛋白抽提试剂盒,WE0265,Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit
关于
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温馨提示:不可用于临床ZL。