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名称:北京Cre重组酶多少钱
编号:BTN130665
规格:50U
产地:国产|进口
英文名:Cre Recombinase
Cre重组酶是细菌噬菌体P1的I型拓扑异构酶,催化loxP位点间的DNA进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子,Cre介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡。loxP识别元件是一个34bp序列,其两端是两个13bp的反向重复序列,中间是起定向作用的8bp间隔区。重组产物根据 loxP位点的位置和相对方向而不同,两个含单loxP 位点的DNA将被融合。两个正向重复 loxP位点间的DNA将以环状形式切割,而两个反向loxP位点间的DNA序列将被翻转。
产品用途:
➤ 两个loxP位点之间DNA的切割。
➤含loxP位点DNA分子的融合。
➤ loxP位点之间DNA序列的翻转。
产品组成:
成分 | 规格 |
Cre重组酶,1000 U/mL | 50μl |
10× Reaction Buffer | 1ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
活性定义:1单位指在50μl反应体系,37℃条件下,30分钟使0.25μg的pLox2+对照DNA产生位点特异性重组所需要的酶量。重组可以通过琼脂糖凝胶电泳分析或通过反应物转化后行*苄抗性平板筛选。
热灭火:70℃加热10分钟。
使用举例:1.按下列组份配制反应液:
DNA溶液 | - |
10×Reaction Buffer | 5μl |
Cre重组酶 | 1μl(1U) |
超纯水 | Up to 50μL |
2.37℃孵育30分钟。
3.70℃孵育10分钟,灭活酶活。
注意事项:1.建议进行琼脂糖凝胶电泳前,将Cre重组酶反应混合物于70℃温育10分钟。
2.由于Cre重组酶反应是一个动态平衡过程,用loxP2+对照底物仅有20-30%发生重组。由于重组产物的量较少,故*化乙锭染色后呈现微弱条带,同时伴有底物染色强度相应减弱。
3.延长温育时间不会提高重组效率,相反,还可能导致大分子量重组产物的生成。
4.反应中增加Cre重组酶量将形成loxP依赖性Cre-DNA复合物,从而YZ重组反应。
更多有关
北京Cre重组酶多少钱的价格及使用说明等,请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
·强RIPA裂解液
编号:BTN131006
英文名称:RIPA Lysis Buffer(Strong)
规格:250mL
RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等实验。本产品裂解强度较强,对膜蛋白、胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子均有很好的效果,本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶YZ剂,能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。我公司各种RIPA裂解液产品特点见下表:
产品名称 | RIPA裂解液(强) | RIPA裂解液(中) | RIPA裂解液(弱) |
有效裂解成分 | 1% Triton X-100,1% deoxycholate,0.1% SDS | 1% NP-40,0.5% deoxycholate,0.1% SDS | 1% NP-40,0.25% deoxycholate |
裂解强度 | 强 | 中 | 温和 |
对膜蛋白的提取 | 很好 | 较好 | 一般 |
对胞浆蛋白的提取 | 很好 | 很好 | 很好 |
对核蛋白的提取 | 很好 | 较好 | 较好 |
胞浆磷酸化蛋白提取 | 很好 | 很好 | 很好 |
细胞核转录因子提取 | 很好 | 很好 | 很好 |
含蛋白酶YZ剂 | 是 | 是 | 是 |
含磷酸酯酶YZ剂 | 是 | 是 | 是 |
主要用途 | WB,IP | WB,IP | WB,IP,co-IP |
储存条件:低温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:对于培养细胞样品:1. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的浓度为1mM。
2. 裂解细胞
2.1 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
2.2 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g离心3~5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意:通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。
对于组织样品:1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g离心3~5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注意:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
备注:
1.为取得的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2.裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3.用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,建议使用BCA蛋白浓度测定试剂盒,不建议使用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
北京Cre重组酶多少钱关键词:BTN130665,Cre Recombinase,Cre重组酶
腺苷脱*酶 Spectinomycin HCl 9026-93-1
环丙沙星 Pyrogallic acid 85721-33-1
ARB11846 人凝血酶血栓调节蛋白复合物(T-TM)含量分析 Human thrombinthrombomodulin compound,t-tm ELISA KIT
粘蛋白胭脂红 GDH-TPI 51395-97-2
ARB11879 人激肽释放酶10(KLK 10)免费代测 Human kallikrein 10,klk 10 ELISA KIT
ARB13235 小鼠淋巴细胞趋化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA代测服务 Mouse lymphotactin,lptn/ltn ELISA KIT
76-03-9 Trichloroacetic acid 三
ARB11242 人毒蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M3(M-AChR M3)Elisa定量检测 Human muscarinic acetylcholine receptor m3,m-achr m3 ELISA KIT
姜黄素指示剂 100ml
ARB12877 小鼠可溶性瘦素受体(sLR)尿液中含量检测 Mouse leptin soluble receptor,slr ELISA KIT
TES缓冲液(1×,pH7.5) 500ml
BTN131160 异硫*酸荧光素标记山羊抗小鼠IgG Goat Anti-Mouse IgG ,FITC Conjugate
9006-59-1 卵清蛋白 Albumin Egg
ARB13085 小鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)Elisa方法检测 Mouse Histone deacetylase,hd ELISA KIT
HC0229 加样槽(可高压灭菌)
北京Cre重组酶多少钱关键词:BTN130665,Cre Recombinase,Cre重组酶
·dITP溶液(2.5mM)
编号:BTN130918
英文名称:dITP Solution(2.5mM)
规格:2mL
dITP(脱氧三磷酸次黄嘌呤核苷),分子式为C10H12N4O13P3Na3,分子量是558.1,消光系数为12.2×103 M-1×cm-1(pH7.0),λmax为249nm。
储存条件:低温运输和-20℃保存、有效期一年。
·即用型蓝白T载体E型(无RNA启动子,无MCS)
编号:BTN120515
英文名称:Instant Blue-White Vector T,Type E
规格:20次
本产品是用Xcm I酶切线性化的DNA片段,其两个末端的5´都有一个突出的T,可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。
产品特点:1. 由于是通过酶切制备,所以载体两端的带T率为,远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2. 克隆的阳性率一般在90%以上,缩短了筛选过程。
3. 来源于pUC19 ,无RNA聚合酶启动子,插入位点两侧无多克隆位点。
4.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
5. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α 肽编码区内,可以进行蓝白斑筛选。
6.含有丝状噬菌体f1 复制起始子,可以制备单链DNA。
产品组成: 组分 | 规格 |
即用型蓝白T载体E型(10ng/μL) | 60μl |
阳性对照(35ng/μl) | 30μl |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期两年。
质粒图谱
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温馨提示:不可用于临床ZL。