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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货酿酒酵母AH109化学感受态细胞哪里买,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京现货酿酒酵母AH109化学感受态细胞哪里买
产地:国产|进口
编号:BTN140386
英文名:E.coli AH109 Chemical Competent Cell
AH109菌株来源于PJ69-2A 酵母菌株,将lacZ 报告基因引入PJ69-2A 诞生了AH109,此菌株是Clontech公司开发的GAL4 系统酵母双杂实验用菌株,MATa型,可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187 通过mating 操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker 为: trp1,leu2,报告基因为:lacZ,HIS3,ADE2,MEL1。AH109-GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用:PGBKT7和PGADT7。质粒PGBKT7的筛选标志为TRP1,用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N 端1~174 位*基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白;质粒PGADT7的筛选标志为LEU,用于表达AD(GAL4 C端768 ~881 位*基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。
GAL4系统原理:一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域:位于N 端1 ~174 位*基酸区段的DNA 结合域(DNA-BD)和位于C 端768 ~881位*基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD 能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS,并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD 单独存在不能激活转录,但当二者接近时,则呈现完整的GAL4活性,使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下,BD 不与AD 结合,将要检测的蛋白质分别与BD和AD 融合,形成 bait 融合蛋白(bait -BD)和prey 融合蛋白(prey-AD),如果 bait和prey发生相互作用,就会促使 BD和AD的相互接近,形成完整的GAL4,从而激活报告基因的转录。AH109 有四个报告基因:lacZ,HIS3,ADE2,MEL1,分别由三种不同的启动子(GAL1,GAL2,MEL1)启动,这三种启动子只有GAL4 识别的17bp 核心区相同,其余部分均不同,大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。本产品经特殊工艺制作而成,经PGADT7质粒检测转化效率为>104cfu/μg DNA。
菌株基因型:MATa,trp1-901,leu2-3,112,ura3-52,his3-200,gal4Δ,gal80Δ,LYS2::GAL1UAS-GAL1TATA-HIS3,MEL1 GAL2UAS-GAL2TATA-ADE2,URA3::MEL1UAS-MEL1TATA-lacZ
产品组成:
成分 | 规格 |
AH109感受态细胞 | 0.1ml×10支 |
PGADT7,10 ng/μL | 10μl |
Carrier DNA,5μg/μL | 100μl |
PEG/LiAc | 5ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:感受态细胞干冰运输、-80℃保存,Carrier DNA -20℃保存;PEG/LiAc 4℃保存;有效期半年。
自备试剂:目的DNA、YPDA、 SD培养基等。
使用方法:1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中依次加入2-5μg预冷的目的质粒、10μLCarrier DNA(95-100℃ 5分钟,快速冰浴,重复一次)、500μl PEG/LiAc,吹打混匀,30℃水浴30分钟(15分钟时翻转6-8次混匀)。
3. 42℃水浴15分钟(7.5分钟时翻转6-8次混匀)。
4. 5000rpm离心 40秒,弃上清。取400μl ddH2O 重悬沉淀,5000rpm离心 30秒,弃上清。
5. 取50μl ddH2O 重悬沉淀,涂板,29℃培养48-96小时。
注意事项:1. 酵母菌株对高温敏感,Z适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。
2.菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后,平板上的Adenine 被酵母消耗完毕,酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine以供利用,然而,有些菌株的ADE2基因被破坏,Adenine 合成途径受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中间产物P - ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
3. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA 平板29℃,48h培养可见直径1mm 克隆;涂SD 单缺平板29℃,48-60h培养可见直径1mm 克隆,涂SD 双缺平板29℃,60-80h培养可见直径1mm 克隆,涂SD 三缺或四缺平板29℃,80-90h培养可见直径1mm 克隆。
4.转化高浓度的质粒可相应减少用于涂板的菌量。
5. 同时转化2-3 种质粒时可增加质粒的用量。
北京现货酿酒酵母AH109化学感受态细胞哪里买极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·一步式胞浆蛋白微量制备试剂盒
编号:BTN91203
英文名称:One-Step Cytoplasmic Protein Miniprep Kit
规格:30次
本产品是专门用于小量真核培养细胞中制备胞浆蛋白.细胞质是真核细胞活动的重要场所,很多与新陈代谢和信号传递的蛋白质都存在于细胞质中,这些蛋白就叫胞浆蛋白。
产品特点:1.一步式操作,整个提取制备过程简便,只需要半小时。
2. 实验重复性好,尤其适合同时处理多个样品。
3.可用于培养的动物细胞,也可以用于新鲜动物组织细胞。
4. 温和裂解法,制备的胞浆蛋白能保持天然活性,可以直接用于活性检测、蛋白浓度测定、各种蛋白质电泳等后续研究。
储存条件:低温运输,4℃保存、有效期一年。
使用方法:将培养到55%-65%覆盖率的体外培养的真核细胞用胰酶法处理后转移到离心管中,离心30秒,在细胞沉淀中加入0.5mL溶液A,悬浮后冰浴10分钟,振荡10分钟,混匀后室温离心10秒,上清即为细胞浆提取物,可以直接放-70℃保存或直接使用。
·绿如蓝核酸染料(UV)
编号:BTN70303
英文名称:DNAgreen(UV)
规格:1.5mL
目前Z常见的替代EB的核酸染料SYBR Green I(属于花*类染料)虽然毒性比EB低、灵敏度比EB高,但由于其化学稳定性差(怕光、怕水、怕热),实验结果的重复性往往不尽人意;此外,SYBR Green I在电泳过程中能在DNA分子间移位,很容易使DNA 条带模糊和扭曲,电泳清晰度和分辨率也不如EB。所以在实际应用中依然不能有效替代EB。本产品是同时具有EB 稳定性和SYBR Green I低毒性的新性核酸染料
产品特点:1.低毒。其主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品,有利于保护使用者的健康和保护日益恶化的环境。
2. 灵敏。检测灵敏度跟EB相当,能满足常规核酸电泳实验要求。
3. 稳定。对光、水和热的稳定性跟EB相当,可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。
4. 无分子间位移现象。不会出现SYBR染料常见的条带模糊和扭曲现象。
5. 使用方法多样。既可以加入熔化的胶中,也可以电泳后染色,还可用于PAGE。
6.跟各种常用的核酸电泳缓冲液(如SuperBuffer-2、TBE、TAE)兼容,但在SuperBuffer-2和TBE中背景。
7. 观察时不需要任何额外的仪器设备或UV光源,可以使用现成的观察EB的300nm UV。
8.可用于RNA染色(也呈绿色)。
9. DNA或RNA浓度较高时还可以直接在日光下观察(需要将胶放在黑色背景下)。由于避免了UV 对DNA的伤害,尤其适用于胶回收实验。
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:注意:虽然本产品的主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品,但操作时Z好还是戴上塑料手套。
使用方法之一:电泳中染色DNA(RNA的染色跟DNA完全一样)。
本方法是将DNAGREEN 直接加入溶化的凝胶中使用,只适用于琼脂糖凝胶电泳,不适用于PAGE。
1. 将DNAGREEN 直接加入到融化的琼脂糖凝胶中,每100mL凝胶加3-10μl DNAGREEN,混合均匀后倒胶。琼脂糖凝胶中不能含任何其他染料(如EB和SYBR Green I,否则会相互干扰)。在100mL 琼脂糖凝胶中加入DNAGREEN的量不要超过10μl,否则背景将很强。注意:一定要保证琼脂糖彻底熔化,尤其是在次熔化胶的时候,否则未熔化的小颗粒将产生跟染料相同的荧光。
2. 将DNA样品与DNA上样液按比例混合后上样。注意:一定要使用不含SDS等去污剂的上样液,否则SDS 会跟染料结合,极大地降低灵敏度。
3.上样后电泳,电泳参数同常规的电泳。如果使用百奥莱博五分钟核酸电泳液SuperBuffer-2,需要较高电压,详见该产品说明书。
4.电泳结束后在300nm左右的UV下观察。注意:不要使用波长为260nm或360nm的UV,否则检测灵敏度会降低。如果DNA或RNA浓度较高,还可以直接在日光下直接观察(需要将胶放在黑色背景下),避免UV 对DNA的伤害,尤其适用于胶回收实验。
注:显色结果:在紫外下,DNA浓度非常高的时候是白色,浓度低的时候是绿色的,单链核酸有时是红色的。
5. 用配置了520-550nm 滤光片(一般呈黄色或深黄色)的相机拍照。注意:不要使用与EB 兼容的红色滤光片(它能阻挡520-550nm的光)。如果能再加上能滤去UV的滤光片,效果会更好。
6.后续 Southern、转膜或DNA胶回收实验按常规操作进行。
使用方法之二:电泳后染色DNA本方法是在电泳后对DNA进行染色,适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE。但该方法需要单独的染色处理,染料用量较大,不推荐用于琼脂糖凝胶的染色。
1. 按照常规方法进行电泳。
2. 用去离子水将DNAGREEN 稀释500倍后(100mL 水需要加0.2mL DNAGREEN),将凝胶放入,室温下摇晃染色30分钟(对琼脂糖凝胶)或15分钟(对PAGE)。
3. 用水脱色 10-30分钟,具体时间需根据背景强弱决定,其余同方法一。
注意:电泳后染色液可以反复使用次数。
疑难解答:Q:本产品可否用于RNA染色?
A:可以,不论RNA是在甲醛变性胶中电泳,还是在普通的SuperBuffer-2、TBE或TAE胶中电泳,RNA染色后在300nm下都跟DNA一样呈绿色。
Q:本产品是否可以加入上样液中进行染色?
A:不行,本产品只能直接加入凝胶中进行染色或电泳后再染色。
Q:为何前端(靠近正极)的DNA 条带很淡或根本看不见?
A:跟EB一样,电泳时DNAGREEN 朝负极方向移动,当前端的DNA(Z小片段)进入没有DNAGREEN的区域时,已经结合的染料分子会逐渐从DNA分子上脱落,所以条带会变淡或根本看不见。解决办法之一是缩短电泳时间或电泳后再染色;之二是在每100mL电泳缓冲液中补加3-5μL染料。
Q:本产品在哪种缓冲液中效果Z好?
A:DNAGREEN染料在不同缓冲液中背景荧光强度不同,从弱到强的顺序是:
SuperBuffer-2、TBE、TAE。在背景较强的缓冲液体中,可以适当降低染料的用量,比如100mL胶中加3-5μl。浓度需要稍做摸索。
Q: 为何电泳后前面部分(靠近正极)的胶呈白色,后面的胶呈黑色?
A: DNAGREEN染料带正电,电泳时往上走,胶的黑色部分是染料上移后留下的无染料胶。
本产品在TAE中背景,可参考上个问题答案更换电泳液以降低背景值。
Q:用SYBR染色的DNA在电泳时为何容易发生条带模糊和扭曲现象?
A:SYBR染料一般与DNA的小沟结合,但在常规电泳条件下该结合并不牢固,染料分子可以在标记的和未标记的DNA分子之间转移,使DNA分子的泳动速度时快(无染料结合时)时慢(有染料结合时),发生条带模糊和扭曲现象。嵌入型染料(如EB和本产品)与DNA 结合牢固,则无此现象。
Q:核酸染料是否都有毒性?
A:核酸染料对动物和人的毒性由多方面决定。
一是染料的膜通透性,EB 被归类为强诱变剂是由于其分子量较小,容易进入细胞内。而EB 二聚体Ethidium Homodimer(EthD)嵌入DNA的能力比EB 强上千倍,但毒性很小,就是由于其分子比EB大,不能透过细胞膜,所以毒性反而更低。SYBR 系列染料虽然低毒,但由于一般都溶于DMSO(因为容易水解,不能使用水溶液做溶剂)中,所以如果溅到皮肤表面,更容易进入皮肤。
二是染料是否容易被人体降解。比如EB在体外就很难降解,一旦进入体内能在人体内残留的时间可能比较长,增加了毒性;而SYBR Green I等染料(也能以嵌入方式与DNA 结合)由于不稳定,比较容易自然降解,所以毒性自然较低。
三是降解产物是否有毒性,比如用很多方法(如强碱法)降解EB 得到的产物有的比EB 毒性更大,而有的染料降解产物毒性却低很多,甚至无毒。
四是染料进入细胞核以后是否能跟DNA 结合,很多实验结果显示即使EB染料也很难嵌入型到染色体中,因为染色体中的DNA 已经紧密地与各种组蛋白结合。
五是细胞修复突变的能力,正常人体都有很强的修复突变的能力,如修复日光中UV 诱导的DNA突变。总之,一种DNA染料的毒性强弱是多种因素综合的结果。
北京现货酿酒酵母AH109化学感受态细胞哪里买关键词:BTN140386,酿酒酵母AH109化学感受态细胞,E.coli AH109 Chemical Competent Cell
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β-半乳糖苷酶(GAL)检测试剂盒(PNP微板法) 100T
鸟嘌呤盐*(代"酸")盐 Methyl jasmonate 635-39-2
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硫*(代"酸")*基胍 Triphenylmethane 996-19-0
1135-40-6 3-环己*(代"胺")-1-丙磺酸 CAPS
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CYB164032 兔抗鸡IgG(1:500~1000)-HRP
PBS磷酸盐缓冲液(0.01mol/L,pH7.2-7.4) 500ml|5L
ARB13573 兔子白介素1可溶性受体I(IL-1sR I)elisa测定使用说明书 Rabbit soluble interleukin-1 receptor i,IL-1sr i ELISA KIT
BL0862 羊抗人IgM免疫血清 0.5ml
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2-*氧乙酸* 2,4-Dimethyl-1H-pyrrole 10042-71-4
BTN60403 红细胞裂解液A型(核酸纯化) Red Cell Lysis Solution ,Type A
Fmoc-S-三*甲基-L-半胱*酸 2-Naphthol 103213-32-7
HC0240 大龙游标瓶口分液器
北京现货酿酒酵母AH109化学感受态细胞哪里买关键词:BTN140386,酿酒酵母AH109化学感受态细胞,E.coli AH109 Chemical Competent Cell
·大肠杆菌XL2-Blue感受态细胞
编号:BTN140376
英文名称:E.coli XL2-Blue Rosetta Competent Cell
规格:10*100μl
本产品为采用大肠杆菌XL2-Blue菌株经特殊工艺处理得到的大肠杆菌化学感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可109,-80℃ 保存几个月转化效率不发生改变。
基因型:Tet RΔ(mcr A)183 Hte[F′ {pro AB lac Iq lac ZΔM15 Tn10(TetR)Amy CamR}]Δ(mcr CB-hsd SMR-mrr)173 end A1 sup E44thi- 1 rec A1 gyr A96 rel A1
储存条件:干冰运输,-80℃保存,有效期6个月。
·ATP溶液(2.5mM)
编号:BTN131216
英文名称:ATP Solution,2.5mM
规格:2mL
ATP分子式为C10H13N5O13P3Na3,分子量是573.1,消光系数为15.4×103 M-1×cm-1(pH7.0),λmax为259nm。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
·Southern DNA Marker DL2000(DIG标记)
编号:BTN120654D
英文名称:Southern DNA Marker DL2000(Labeled by DIG)
规格:20次
ATP分子式为C10H13N5O13P3Na3,分子量是573.1,消光系数为15.4×103 M-1×cm-1(pH7.0),λmax为259nm。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
·DNA marker(100-1500bp)
编号:BTN70503X
英文名称:DNA ladder(100-1500bp)
规格:50次
本系列产品用作凝胶电泳中双链线状DNA的分子量大小参照。它们是由一系列大小不同的单一DNA片段混合组成。成分中已经含有上样缓冲液,所以可以直接上样电泳。得到的电泳条带长度准确,明亮清晰,背景较低,稳定性很好。每次加样量为5μL,可用于相对定量。本系列产品与各种琼脂糖和各种电泳缓冲液兼容。
储存条件:低温运输、-20℃保存,有效期一年。
使用方法:直接上样电泳,每次加样量为5μL。
使用效果:注:500bp条带为20ng/uL,其余每条带为10ng/uL
疑难解答:a)如对带型要求较高,建议使用0.8-1.5%琼脂糖凝胶(对SuperBuffer-2缓冲液,电压为250-400V)或1.5-2.0%琼脂糖凝胶(对TAE或TBE缓冲液,电压为80V),同时适当延长电泳时间。
b)电泳图象的质量与琼脂糖、电泳缓冲液有关。请采用高质量的琼脂糖,同时要经常更换电泳缓冲液。
c)本产品条带均匀,亮度相当,但在EB胶中长时间电泳有可能会出现250bp以下的条带变淡。可以通过先电泳再染色,加大EB浓度等方法解决。
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温馨提示:不可用于临床ZL。